Метод определения редуктазы с метиленовым голубым
Сущность метода. Метод основан на восстановлении метиленового голубого окислительно-восстановительными ферментами, выделяемыми в молоко микроорганизмами. По продолжительности обесцвечивания метиленового голубого оценивают бактериальную обсемененность сырого молока.
Проведение анализа. В пробирки наливают по 1 см3 рабочего раствора метиленового голубого и по 20 см3 исследуемого молока, закрывают резиновыми пробками и смешивают путем медленного трехкратного переворачивания пробирок.
Пробирки помещают в редуктазник с температурой воды (37 ± 1) °С.
При отсутствии редуктазника можно пользоваться водяной баней, помещаемой в термостат с температурой (37 ± 1) °С.
Вода в редуктазнике или водяной бане после погружения пробирок с молоком должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше. Температуру воды поддерживают в течение всего времени определения (37 ± 1) °С. Для предотвращения влияния на реакцию света редуктазник должен быть плотно закрыт крышкой. Момент погружения пробирок в редуктазник считают началом анализа. Наблюдение за изменением окраски ведут через 40 мин, 2,5 и 3,5 ч с начала проведения анализа. Окончанием анализа считают момент обесцвечивания окраски молока. При этом остающийся небольшой кольцеобразный окрашенный слой вверху (шириной не более 1 см) или небольшая окрашенная часть внизу пробирки (шириной не более 1 см) в расчет не принимаются. Появление окрашивания молока в этих пробирках при встряхивании не учитывают.
Обработка результатов. В зависимости от продолжительности обесцвечивания молоко относят к одному из четырех классов, указанных в табл. 42.
Таблица 42
Класс молока | Продолжительность обесцвечивания, ч | Ориентировочное количество бактерий в 1 см3 молока, КОБ |
Высший | Более 3,5 | До 300 тыс. |
I | 3,5 | От 300 тыс. до 500 тыс. |
II | 2,5 | От 500 тыс, до 4 млн |
III | 40 мин | От 4 млн до 20 млн |
Метод определения редуктазы с резазурином
Сущность метода. Метод основан на восстановлении резазурина окислительно-восстановительными ферментами, выделяемыми в молоко микроорганизмами. По продолжительности изменения окраски резазурина оценивают бактериальную обсемененность сырого молока.
Проведение анализа. Пробу с резазурином следует проводить не ранее, чем через 2 ч после доения.
В пробирки наливают по 1 см3 рабочего раствора резазурина и по 10 см3 исследуемого молока, закрывают резиновыми пробками и смешивают путем медленного трехкратного перевертывания пробирок. Пробирки помещают в редуктазник с температурой воды (37 ± 1) °С.
При отсутствии редуктазника можно использовать водяную баню, помещенную в термостат с температурой (37 ± 1) °С.
Вода в редуктазнике или водяной бане после погружения пробирок с молоком должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше. Температуру воды поддерживают в течение всего времени определения (37 ± 1) °С.
Пробирки с молоком и резазурином на протяжении анализа должны быть защищены от света прямых солнечных лучей (редуктазник должен быть плотно закрыт крышкой).
Время погружения пробирок в редуктазник считают началом анализа.
Показания снимают через 1 и 1,5 ч.
Появление окрашивания молока в этих пробирках при встряхивании не учитывают.
По истечении 1 ч пробирки вынимают из редуктазника. Пробирки с молоком, имеющие серо-сиреневую окраску до сиреневой со слабым серым оттенком, оставляют в редуктазнике еще на 30 мин.
Обработка результатов. В зависимости от продолжительности обесцвечивания или изменения цвета молоко относят одному из четырех классов, указанных в табл. 43.
Таблица 43
Класс молока | Продолжительность обесцвечивания или изменения цвета, ч | Окраска молока | Ориентировочное количество бактерий в 1 см3 молока, КОЕ |
Высший | 1,5 | Серо-синеватая до сиреневой со слабым серым оттенком | До 300 тыс. |
I | 1 | Серо-синеватая до сиреневой со слабым серым оттенком | От 300 тыс. до 500 тыс. |
II | 1 | Сиреневая с розовым оттенком или ярко-розовая | От 500 тыс. до 4 млн |
III | 1 | Бледно-розовая или белая | От 4 млн до 20 млн |
Молоко, имеющее через 1,5 ч окраску, соответствующую 1-му классу, относят к высшему классу.