Споры имеют вид образований круглой или овальной формы, находящихся в теле микробной клетки. Различают три | вида расположения спор по отношению к длинной оси палочки: центральное – спора находится в центре тела микроба, субтерминальное – спора располагается ближе к одному из ее концов, терминальное – спора располагается на конце палочки. Диаметр споры может не превышать диаметр тела микробной клетки, вследствие чего форма палочки при спорообразовании не изменяется (бациллы). В других случаях диаметр споры больше поперечного размера микробной клетки и тело ее в месте образования споры утолщается (клостридии).
Форма, величина «расположение спор постоянны для каждого вида бацилл.
В отличие от вегетативной части клетки, споры содержат значительно меньше свободной воды и большое количество липидов и кальция. Плотная оболочка спор, непроницаемая для воды, окрашивается с большим трудом, поэтому при обычных методах окраски споры имеют вид неокрашенных пустот внутри клетки. Для окраски спор пользуются специальными методами с применением протрав (кислоты или щелочи). Протравы разрыхляют оболочку споры, облегчая проникновение в нее красителя. Окрасившиеся споры обладают кислотоустойчивостью, в отличие от вегетативного тела микробной клетки, обесцвечивающегося под действием кислоты. Поэтому принцип окраски спор и кислотоустойчивых бактерий одинаков: препарат окрашивают основным красителем, затем обесцвечивают кислотой и докрашивают дополнительно в какой-нибудь контрастный цвет.
6.5.1. Окраска спор методом Ожешко
- На высушенный нефиксированный препарат (мазок готовится толстым и на краю стекла) наливают несколько капель 0,5 % раствора хлористоводородной кислоты и подогревают 1–2 мин над пламенем горелки до закипания, после чего остатки кислоты сливают;
- остывший препарат промывают водой, подсушивают и фиксируют на пламени горелки;
- окрашивают карболовым фуксином Циля (рецепт 17) с подогреванием до появления паров;
- обесцвечивают 5 % раствором серной кислоты в течение нескольких секунд;
- промывают водой;
- докрашивают метиленовым синим Леффлера (синька Леффлера – рецепт 9) или 1 % водным раствором малахитового зеленого (рецепт 23) 3–5 мин.
Окрашенные споры имеют рубиново-красный цвет, вегетативные тела микробных клеток приобретают цвет дополнительной краски – голубой при применении метиленового синего или зеленый при использовании малахитового зеленого.
6.5.2. Окраска спор методом Пешкова
- На фиксированный мазок наливают синьку Леффлера (рецепт 9), дают краске закипеть. Окрашивание мазка происходит кипящей синькой в течение 20–30 с;
- препарат промывают водой;
- докрашивают 0,5 % водным раствором нейтральрот в течение 30–60 с (рецепт 25);
- промывают водой и высушивают.
Споры, окрашенные синькой Леффлера, имеют голубой цвет, вегетативные тела бактерий – красный цвет.