Кишечная палочка (Escherichia coli) является самым первым санитарно-показательным микроорганизмом, сохранившим свое значение до сих пор. Еще в 1888 г. французский врач Е. Масе предложил использовать эту бактерию в качестве показателя фекального загрязнения воды.
В третьем издании Руководства ВОЗ по контролю качества питьевой воды в качестве показателя выбора для оценки свежего фекального загрязнения рекомендуется показатель E.coli (индексный).
В качестве альтернативного показателя фекального загрязнения (при определенных обстоятельствах) рекомендуется показатель Термотолерантные Колиформные Бактерии (ТКБ) (индексный).
Показатель Колиформные Бактерии (КБ) рекомендуется как технологический показатель для оценки качества водоподготовки (индикаторный).
Согласно отечественной нормативной базе Колиформные Бактерии (КБ) в терминологии ВОЗ соответствуют показателю Общие Колиформные Бактерии (ОКБ).
Далее в отечественной нормативной базе появился новый показатель ГКБ (Глюкозоположительные Колиформные Бактерии). Он является ничем иным, как попыткой коллектива авторов реанимировать вышедший из употребления показатель БГКП, который отличается от ГКБ только нормируемым объемом и диагностическая ценность которого также сомнительна. БГКП нормируются на литр, а ГКБ на 300 мл.
Показатель ГКБ существует только в отечественной нормативной базе и больше нигде в мире.
ГКБ – это грамотрицательные палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидазой, способные расти на среде Эндо (дифференциальная лактозная среда с солями желчи), и которые сбраживают глюкозу до кислоты и газа при 37°С за 24 часа.
Подозрительными на ГКБ считаются все колонии (любого оттенка с отпечатком или без, с металлическим блеском или без), кроме сухих, пленчатых, морщинистых или склонных к ползучему росту. Однако этими свойствами обладают практически все представители семейства Enterobacteriacea, кроме представителей негазообразующих родов Shigella, Hafnia и некоторых других. Поскольку в данное семейство входит много сапрофитов и представителей эпифитной микрофлоры, которые прекрасно размножаются в условиях окружающей среды, показатель ГКБ не может рассматриваться в качестве показателя фекального загрязнения. ГКБ можно рассматривать (в определенной степени) как технологический показатель при проведении дезинфекционных мероприятий, например, водоподготовки.
ОКБ (Общие Колиформные Бактерии) – это грамотрицательные палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидазой, которые способны сбраживать до кислоты и газа не только глюкозу, но и лактозу при температуре 37°С за 48 часов. Поэтому на среде Эндо они образуют темные малиновые, бордовые или красные колонии с отпечатком и металлическим блеском или без него. Отпечаток это изменение (потемнение) среды под колонией, который является следствием образования большого количества альдегидов и кислот при интенсивном сбраживании лактозы посредством муравьинокислого брожения, характерного для ОКБ.
В целом ОКБ более узкая группа микроорганизмов, чем ГКБ. Тем не менее, группа ОКБ включает достаточно большое число родов семейства Enterobacteriacea, представители которых способны сбраживать лактозу: Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Pantoea, Rahnella и др. Среди этих микроорганизмов также присутствует большое число свободноживущих сапрофитов, поэтому показатель ОКБ также мало пригоден для оценки фекального загрязнения, но является важным технологическим (индикаторным) показателем.
Только начиная с показателя ТКБ (Термотолерантные Колиформные Бактерии) речь пойдет о показателях свежего фекального загрязнения. ТКБ – это грамотрицательные палочки, не обладающие цитохромоксидазой, которые способны сбраживать лактозу до кислоты и газа не только при температуре 37°С за 48 ч, но и при 44°С за 24 часа. На среде Эндо они также образуют темные малиновые, бордовые или красные колонии с отпечатком и металлическим блеском или без него.
Способность сбраживать лактозу при более высокой температуре, существенно сужает круг представителей семейства Enterobacteriacea, входящих в нормативный показатель. Кроме E. coli, которая является доминирующим представителем группы, в нее входят только отдельные представители родов Citrobacter, Enterobacter и Klebsiella.
Что же касается показателя E. coli, то, более корректно его было бы называть «предполагаемые E.coli» как в первой версии стандарта ISO 9308-1:1990, потому что перечень предлагаемых подтверждающих тестов не всегда достаточен для достоверной идентификации.
На сегодняшний день в РФ показатель E. coli для водных объектов не нормируется. Он только определяется в рамках ГОСТ Р, который носит рекомендательный характер. По версии этого документа к E. coli будут относится грамотрицательные палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидазой, дающие типичный рост на среде Эндо, которые способны сбраживать лактозу до кислоты и газа при 44°С за 24 часа и образовывать индол на среде с триптофаном. Результаты определения показателей ГКБ, ОКБ, ТКБ и E.coli представляются в виде КОЕ/100 мл; колиформные бактерии не должны обнаруживаться в 100 мл питьевой воды при трехкратном исследовании нормируемого объема.
***
КОЕ/мл – что это значит?
КОЕ – это «колониеобразующая единица» (англ. Colony Forming Unit или CFU). Обозначает число бактерий, которые способны сформировать полноценную микробную колонию.
Обычно КОЕ определяют в 1 мл исследуемого субстрата – молочного продукта, лекарства или биологической жидкости. В результате получают показатель КОЕ/мл. Зачастую всего 1 микробная клетка способна образовать целую колонию.
Количество жизнеспособных бактерий определяют также в твердых телах и в воздухе, которые обозначают как КОЕ/г и КОЕ/м2 соответственно.
Показатель КОЕ всегда достигает достаточно больших величин, например 1*104 (10 тысяч), 1*105 (100 тысяч), 1*106 (1 миллион) КОЕ/мл.
***
Стафилококки (лат. Staphylococcus) — род бактерий семейства Staphylococcaceae.
Представители данного рода — неподвижные грамположительные кокки, диаметр клетки которых составляет от 0,6 до 1,2 мкм. Для представителей рода характерно деление в нескольких плоскостях, результатом чего есть расположение микробных клеток «виноградными гроздьями» в чистой культуре.
Стафилококки — факультативные анаэробы, хемоорганотрофы с окислительным и ферментативным типом метаболизма, каталазопозитивные и оксидозонегативные.
Формы колоний на плотных питательных средах — округлые, выпуклые, пигментированные (белые, желтые, золотистые). На жидких — равномерное помутнение.
Широко распространены в почве, воздухе, представители нормальной кожной микрофлоры человека и животных. В состав этого рода входят патогенные и условно патогенные для человека виды, колонизирующие носоглотку, ротоглотку и кожные покровы.
Патогенные стафилококки продуцируют эндо- и экзотоксины, ферменты, нарушающие жизнедеятельность клеток.
***
Сальмонеллы (лат. Salmonella) — род неспороносных бактерий, имеющих форму палочек (длина 1-7 мкм, ширина около 0,3-0,7 мкм). Сальмонеллы, как правило, не ферментируют лактозу и патогенны для людей и других животных при пероральном введении. Некоторые виды являются возбудителями брюшного тифа, паратифов и других сальмонеллёзов.
Грамотрицательны, факультативные анаэробы, большинство подвижно (благодаря перитрихиям, то есть расположенным по всей поверхности бактерии жгутикам).
На плотных питательных средах образуют круглые колонии серовато-белого цвета, при росте на бульоне — помутнение и осадок. В мазках располагаются беспорядочно.
Не образуют спор, имеют микрокапсулу, перитрихи. При отсутствии гравитации сальмонеллы объединяются в тонкую плёнку.
Сальмонеллы сбраживают углеводы (глюкозу, маннозу, ксилозу, декстрин) и спирты (инозит, дульцит) с образованием кислоты, а иногда и газа. Оптимальными для роста являются температура 37°С, рН среды 7,2-7,4. Они неприхотливы и растут на простых питательных средах.
***
Листерии (лат. Listeria) — род грамположительных палочковидных бактерий. Некоторые виды являются возбудителями заболеваний животных и человека.
Микроорганизмы рода Listeria представляют собой палочки с закруглёнными концами, иногда почти кокки, одиночные или в коротких цепочках, реже образуют длинные нити (0,4-0,5 × 0,5-2 мкм).
Листерии ферментируют глюкозу, каталазоположительны, оксидазоотрицательны, образуют цитохромы. Листерии некислотоустойчивы. Не образуют споры и капсулы, факультативные анаэробы, хемоорганогетеротрофы.
***
Молочнокислые бактерии — группа микроаэрофильных грамположительных микроорганизмов, сбраживающих углеводы с образованием молочной кислоты как одного из основных продуктов.
Традиционно к молочнокислым бактериям относят неподвижных, неспорообразующих кокковидных или палочковидных представителей отряда Lactobacillales, например:
- Lactococcus lactis. Это неподвижные кокки, не образующие спор, хорошо окрашиваются анилиновыми красителями и по Граму, в молодом виде имеют форму стрептококка. На мясо-пептонном агаре дают точечные круглые колонии, в толще агара — чечевицеобразные. Lactis разлагает сахар без образования газов на две молекулы молочной кислоты. Наиболее благоприятная для развития температура составляет +30…+35 °C.
- Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus — болгарская палочка. Бактерия названа так, потому что в своё время была выделена из болгарского кислого молока «йогурта». Неспорооробразующая неподвижная бактерия, достигающая 20 мкм в длину и часто соединяющаяся в короткие цепочки.
Является термофильной, и лучше всего растет при температуре от 42°C. Молоко свертывает быстро, причем содержание молочной кислоты в нём доходит до 32 г/л, что в пять раз больше, чем при заражении молочнокислым стрептококком.
***
Общее микробное число (ОМЧ) — количество микроорганизмов в единице объема исследуемого объекта. Выражается в кл/мл, кл/г, кл/м3 или КОЕ6/мл, КОЕ/г, КОЕ/м3.
***
КМАФАнМ – количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.