Метод определения редуктазы с метиленовым голубым

Сущность метода. Метод основан на восстановлении метиленового голубого окислительно-восстановительными ферментами, выделяе­мыми в молоко микроорганизмами. По продолжительности обес­цвечивания метиленового голубого оценивают бактериальную обсемененность сырого молока.

Проведение анализа. В пробирки наливают по 1 см3 рабочего раство­ра метиленового голубого и по 20 см3 исследуемого молока, закрывают резиновыми пробками и смешивают путем медленного трехкратного переворачивания пробирок.

Пробирки помещают в редуктазник с температурой воды (37 ± 1) °С.

При отсутствии редуктазника можно пользоваться водяной баней, помещаемой в термостат с температурой (37 ± 1) °С.

Вода в редуктазнике или водяной бане после погружения проби­рок с молоком должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше. Температуру воды поддерживают в течение всего времени определения (37 ± 1) °С. Для предотвращения влияния на ре­акцию света редуктазник должен быть плотно закрыт крышкой. Мо­мент погружения пробирок в редуктазник считают началом анализа. Наблюдение за изменением окраски ведут через 40 мин, 2,5 и 3,5 ч с начала проведения анализа. Окончанием анализа считают момент обесцвечивания окраски молока. При этом остающийся небольшой кольцеобразный окрашенный слой вверху (шириной не более 1 см) или небольшая окрашенная часть внизу пробирки (шириной не бо­лее 1 см) в расчет не принимаются. Появление окрашивания молока в этих пробирках при встряхивании не учитывают.

Обработка результатов. В зависимости от продолжительности обес­цвечивания молоко относят к одному из четырех классов, указанных в табл. 42.

 Таблица 42

Класс молока Продолжительность обесцвечивания, ч Ориентировочное количество бактерий в 1 см3 молока, КОБ
Высший Более 3,5 До 300 тыс.
I 3,5 От 300 тыс. до 500 тыс.
II 2,5 От 500 тыс, до 4 млн
III 40 мин От 4 млн до 20 млн

Метод определения редуктазы с резазурином

Сущность метода. Метод основан на восстановлении резазурина окислительно-восстановительными ферментами, выделяемыми в мо­локо микроорганизмами. По продолжительности изменения окраски резазурина оценивают бактериальную обсемененность сырого молока.

Проведение анализа. Пробу с резазурином следует проводить не ра­нее, чем через 2 ч после доения.

В пробирки наливают по 1 см3 рабочего раствора резазурина и по 10 см3 исследуемого молока, закрывают резиновыми пробками и сме­шивают путем медленного трехкратного перевертывания пробирок. Пробирки помещают в редуктазник с температурой воды (37 ± 1) °С.

При отсутствии редуктазника можно использовать водяную баню, помещенную в термостат с температурой (37 ± 1) °С.

Вода в редуктазнике или водяной бане после погружения пробирок с молоком должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше. Температуру воды поддерживают в течение всего вре­мени определения (37 ± 1) °С.

Пробирки с молоком и резазурином на протяжении анализа долж­ны быть защищены от света прямых солнечных лучей (редуктазник должен быть плотно закрыт крышкой).

Время погружения пробирок в редуктазник считают началом ана­лиза.

Показания снимают через 1 и 1,5 ч.

Появление окрашивания молока в этих пробирках при встряхива­нии не учитывают.

По истечении 1 ч пробирки вынимают из редуктазника. Пробирки с молоком, имеющие серо-сиреневую окраску до сиреневой со слабым серым оттенком, оставляют в редуктазнике еще на 30 мин.

Обработка результатов. В зависимости от продолжительности обес­цвечивания или изменения цвета молоко относят одному из четырех классов, указанных в табл. 43.

 Таблица 43

Класс молока Продолжительность обесцвечивания или изменения цвета, ч Окраска молока Ориентировочное количество бактерий в 1 см3 молока, КОЕ
Высший 1,5 Серо-синеватая до сиреневой со слабым серым оттенком До 300 тыс.
I 1 Серо-синеватая до сиреневой со слабым серым оттенком От 300 тыс. до 500 тыс.
II 1 Сиреневая с розовым оттенком или ярко-розовая От 500 тыс. до 4 млн
III 1 Бледно-розовая или белая От 4 млн до 20 млн

Молоко, имеющее через 1,5 ч окраску, соответствующую 1-му клас­су, относят к высшему классу.