Объединенную пробу объемом 500 см3 составляют из точечных проб, отобранных из каждой фляги или цистерны после органолептической оценки молока и рассортировки его по кислотности предельным ме­тодом по ГОСТ 3624. Для проведения редуктазной пробы и пробы на наличие ингибирующих веществ из объединенной пробы молока вы­деляют пробу объемом 50–60 см3.

Пробу, отправляемую в лабораторию вне данного предприятия, пломбируют или опечатывают и снабжают этикеткой, на которой ука­зывают.

  • номер пробы;
  • наименование предприятия-поставщика;
  • наименование и сорт продукта (молока);
  • дату и час отбора проб;
  • должность и подпись лица, отобравшего пробу;
  • объем необходимых анализов.

Пробы должны храниться и транспортироваться до начала иссле­дований в условиях, обеспечивающих температуру продуктов не выше 6 °С, не допуская подмораживания.

Аппаратура, материалы и реактивы:

  • весы лабораторные 2-го класса точности, поверочная цена деле­ния не более 0,001 г для взвешивания реактивов, по ГОСТ 24104;
  • весы лабораторные 4-го класса точности, поверочная цена деле­ния не более 0,05 г для приготовления навесок исследуемых об­разцов, по ГОСТ 24104;
  • термометры стеклянные жидкостные (не ртутные), диапазон из­мерения 0–100 °С, цена деления шкалы 1 °С, по ГОСТ 28498;
  • термостат, позволяющий поддерживать температуру 15–55 °С с отклонением от заданной температуры ± 1 °С;
  • стерилизатор паровой медицинский по ГОСТ 19569 или автоклав горизонтальный;
  • шкаф сушильный, позволяющий поддерживать температуру (160 ±5) °С;
  • анализатор потенциометрический для контроля рН, диапазон измерения рН 3–8, погрешность измерения рН ± 0,05, по ГОСТ 19881;
  • редуктазник, позволяющий поддерживать температуру 25–55 °С;
  • баня водяная;
  • пробор для счета колоний бактерий;
  • микроскоп световой биологический по нормативному документу или других аналогичных марок;
  • плитка электрическая по ГОСТ 14919;
  • спиртовка по ГОСТ 23932;
  • петля бактериологическая;
  • лупа складная карманная по ГОСТ 25706;
  • пробки резиновые конусные по нормативному документу;
  • бумага фильтровальная по ГОСТ 12026;
  • пергамент по ГОСТ 1341;
  • вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556;
  • кастрюли разные по ГОСТ 17151;
  • пробойник;
  • чашки Петри по ГОСТ 25336;
  • стекла предметные для микропрепаратов по ГОСТ 9284;
  • бюретки исполнения 1, 2, 3-го класса точности, вместимостью 5, 10, 50 см3, цена деления 0,1 см3;
  • пипетки исполнения 1, 4, 5, 6, 7 1 и 2-го классов точности, вме­стимостью 1, 2, 5 и 10 см3;
  • стаканчики для взвешивания (бюксы) типов СВ и СН по ГОСТ 25336;
  • колбы исполнения 2, вместимостью 50, 100, 200, 500, 1000 см3 2-го класса точности по ГОСТ 1770;
  • цилиндры исполнения 1 и 2, вместимостью 50, 100 см3 по ГОСТ 1770;
  • поплавки стеклянные;
  • пробирки типов П1, П2, диаметром 16 мм, высотой 150 мм и диа­метром 21 мм, высотой 200 мм по ГОСТ 25336;
  • ступки лабораторные фарфоровые по ГОСТ 9147;
  • ланцет;
  • натрий лимоннокислый 5,5-водный по ГОСТ 22280;
  • натрий хлористый по ГОСТ 4233;
  • натрия гидроокись по ГОСТ 4328;
  • калия гидроокись по ГОСТ 24363, раствор с массовой концентра­цией 10 г/дм3;
  • натрий двууглекислый по ГОСТ 2156, раствор с массовой кон­центрацией 100 г/дм3;
  • спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962 (на территории РФ действует ГОСТ Р 51652) и спирт этиловый ректификован­ный технический по ГОСТ 18300, 96%-ный раствор;
  • масло иммерсионное для микроскопии по ГОСТ 13739;
  • калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198;
  • кислота соляная по ГОСТ 3118;
  • магний сернокислый по ГОСТ 4523;
  • кристаллический фиолетовый по нормативному документу, рас­твор с массовой концентрацией 10 г/дм3;
  • метиленовый голубой, индикатор по нормативному документу или аналогичный производства Индии;
  • резазурино-натриевая соль по нормативному документу или резазурин в таблетках;
  • вода дистиллированная по ГОСТ 6709;
  • вода питьевая по ГОСТ 2874 (на территории РФ действует ГОСТ Р 512321);
  • агар микробиологический по ГОСТ 17206;
  • пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805;
  • желчь бычья и других сельскохозяйственных животных (нативная) по нормативному документу;
  • среда сухая Кесслер по нормативному документу;
  • среда агаровая модифицированная для определения общего ко­личества бактерий в молоке и молочных продуктах по норматив­ному документу;
  • лактоза по нормативному документу;
  • порошок сычужный по нормативному документу;
  • бумажки индикаторные по нормативному документу или зару­бежного производства;
  • индикатор универсальный.

Подготовка к анализу. Подготовка посуды и материалов. Всю новую посуду, предназначенную для бактериологических работ, кипятят в под­кисленной воде (раствор соляной кислоты с объемной долей 1–2 %) в течение 15 мин и затем ополаскивают дистиллированной водой.

Вымытую посуду стерилизуют в сушильном шкафу при (160 ± 5) °С в течение 2 ч или в автоклаве при (121 ± 2) °С в течение (30 ± 1) мин с последующим подсушиванием.

Чашки Петри, пипетки стерилизуют завернутыми в бумагу или в металлических пеналах. В конец пипетки предварительно вклады­вают кусочек ваты. Резиновые пробки стерилизуют в автоклаве, завер­нутыми в бумагу. При отсутствии аппаратуры для стерилизации (для определения редуктазы, бродильной и сычужно-бродильной проб) посуду, пипетки и пробы непосредственно перед испытанием кипя­тят в дистиллированной воде или конденсате не менее 30 мин. Сте­рильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах или ящиках с крышками.

Приготовление питательных сред и реактивов. Приготовление рас­твора хлористого натрия. Состав: хлористый натрий – 8,5 г; питьевая вода – 1000 см3.

В 1000 см3 питьевой воды растворяют 8,5 г хлористого натрия, раз­ливают раствор в чистые пробирки диаметром 21 мм по 10 см3, а в кол­бы – по 93 см3 и стерилизуют при (121 ± 2) °С в течение (20 ± 1) мин. После стерилизации в пробирках должно остаться 9 см3 раствора хло­ристого натрия, а в колбах – 90 см3 (количество, которое необходимо для приготовления разведений из посевного материала).

Приготовление среды Кесслер (модифицированной). Состав: пептон – 10 г; стерильная желчь – 50 см3; лактоза – 2,5 г; раствор кристалличе­ского фиолетового с массовой концентрацией 10 г/дм3 – 2 см3; дис­тиллированная вода – до 1000 см3.

16 г сухой среды Кесслер помещают в колбу и доливают питьевой водой до 1000 см3. Смесь размешивают и кипятят при помешивании (25 ± 5) мин. Объем доводят питьевой водой до 1000 см3 и фильтруют через вату. Разливают в пробирки с поплавками по 5 см3 или колбочки с поплавками по 40–50 см3 и стерилизуют при (121 ± 2) °С в течение (10 ± 1) мин.

Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет.

Допускается приготовление среды Кесслер из отдельных ингреди­ентов.

Для этого к 1000 см3 питьевой воды прибавляют 10 г пептона и 50 см3 стерильной желчи (желчь бычья или других сельскохозяйственных жи­вотных), кипятят смесь при помешивании (25 ± 5) мин и фильтруют ее через вату. В полученном фильтрате растворяют 2,5 г лактозы и дово­дят объем питьевой водой до 1000 см3, устанавливают реакцию среды (рН 7,4–7,6), после чего добавляют 2 см3 раствора кристаллического фиолетового с массовой концентрацией 10 г/дм3, разливают в пробир­ки с поплавками по 5 см3 или колбочки с поплавками по 40–50 см3 и стерилизуют при (121 ± 2) °С в течение (10 ± 1) мин. Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет.

Приготовление спиртового раствора метиленового голубого для окра­ски препаратов. 10 г метиленового голубого смешивают со 100 см3 96%-ного раствора этилового спирта. Раствор ставят в термостат при температуре (37 ± 1) °С на 24 ч, а затем фильтруют в термостате при той же температуре.

Срок хранения раствора метиленового голубого в термостате при температуре (37 ± 1) °С не более 3 мес.

Приготовление краски для препаратов. К 30 см3 спиртового раство­ра метиленового голубого прибавляют 100 см3 дистиллированной воды и 1 см3 раствора гидроокиси калия с массовой концентрацией 10 г/дм3.

Для проведения редуктазной пробы с метиленовым голубым гото­вят водный раствор с массовой концентрацией метиленового голубого 0,005 г/см3. Для этого 0,5 г метиленового голубого переносят в мер­ную колбу вместимостью 100 см3 и доводят до метки прокипяченной и охлажденной до (25 ± 2) °С дистиллированной водой. Смесь тщатель­но перемешивают до полного растворения. Срок хранения приготов­ленного раствора не более 12 мес. в банках, защищенных от света.

Для приготовления раствора метиленового голубого с массовой концентрацией метиленового голубого 0,00015 г/см3 берут 6 см3 рас­твора с массовой концентрацией 0,005 г/см3 и смешивают со 194 см3 дистиллированной воды. Срок хранения приготовленного раствора не более 30 сут в холодильнике.

Приготовление раствора резазурина. Основной раствор резазурина-натриевой соли для редуктазной пробы готовят следующим образом: 100 мг резазурина-натриевой соли переносят в мерную колбу вмести­мостью 200 см3 и доводят до метки прокипяченной и охлажденной до (25 ± 2) °С дистиллированной водой. Смесь тщательно перемешивают.

Срок хранения основного раствора резазурин-натриевой соли не более 30 сут при температуре 8–10 °С.

Рабочий раствор резазурин-натриевой соли готовят разбавлени­ем основного раствора прокипяченной и охлажденной до (25 ± 2) °С дистиллированной водой в соотношении 1 : 2,5 (например, к 10 см3 основного раствора прибавляют 25 см3 воды). Массовая доля резазу­рина в рабочем растворе 0,014%.

При использовании резазурина в таблетках для приготовления рабо­чего раствора 1 таблетку растворяют в 50 см3 прокипяченной и охлаж­денной до (25 ± 2) °С дистиллированной воды. Массовая доля резазу­рина в этом растворе 0,01 %.

Срок хранения рабочего раствора резазурина не более 3 сут при тем­пературе 0–5 °С.

Основной и рабочий раствор хранят в банках, защищенных от света.