При некоторых микробиологических исследованиях возни­кает необходимость посева определенного количества микроб­ных тел в жидкую или плотную питательную среду. В таких случаях из микробной культуры, предназначенной для посева, пользуясь бактериальным стандартом мутности, готовят взвесь, содержащую в единице объема (1 мл) заданное количество микробных тел.

Государственным научно-исследовательским институтом стандартизации и контроля медицинских и биологических пре­паратов им. Л.А.Тарасевича изготовлен отраслевой стандарт­ный образец мутности ОСО 42-28–85–02П[1] для визуального определения концентрации микробной взвеси.

Комплект ОСО 42-28-85–02 состоит из двух пробирок-эта­лонов, соответствующих 10 и 5 единицам мутности.

Эталон ОСО на 10 единиц мутности ориентировочно соот­ветствует следующим концентрациям клеток в 1 мл:

0,93х109 клеток/мл для микробов кишечной группы;

11х109 клеток/мл для микробов коклюшной группы;

1,7х109 клеток/мл для бруцеллезных микробов;

2,2х109 клеток/мл для холерного вибриона;

5х109 клеток/мл для туляремийных микробов.

Перед началом каждого измерения пробирку эталона ОСО, держа в руке в горизонтальной плоскости, нерезко встряхивают в течение 10–15 с с амплитудой 50–100 мм и частотой встря­хивания 1–2 раза в секунду. Затем исследуемую бактериальную взвесь наливают в объеме 6–7 мл в пробирку, входящую в комплект ОСО, что соответствует объему наполнения жидкос­тью ОСО.

Исследуемая бактериальная взвесь должна быть гомогенной с равномерным распределением частиц взвеси в пробирке. Пробирку ОСО совмещают с исследуемой бактериальной взве­сью в вертикальном положении на уровне глаз, приложив плотно к задней поверхности шрифтовую таблицу. Пробирки освещаются равномерно источником рассеянного света, кото­рым могут быть люминесцентная лампа мощностью от 20 до 40 Вт, лампа накаливания матовая (с плафоном) мощностью от 40 до 60 Вт, а также рассеянный дневной свет.

В случае одинаковой четкости видимых элементов шрифто­вой таблицы через ОСО и пробирку с исследуемой бактери­альной взвесью мутность их считают одинаковой, равной мут­ности, указанной на этикетке ОСО. Если мутность исследуе­мой бактериальной взвеси не совпадает с пробиркой эталона ОСО, прибегают к уравниванию мутности, добавляя в зависи­мости от существующего различия физиологический раствор или микробную взвесь высокой концентрации[2].

 

8.3.1. Стандарт мутности по McFarland

Стандарт мутности по McFarland (МcF) также используется при приготовлении бактериальной суспензии определенной мут­ности. Методика его изготовления заключается в следующем:

  • • Изготавливаются растворы: ВаСl2 – 1 %,

Н2SO4 - 1 %.

ВНИМАНИЕ! ВаСl2 – ядовитое вещество; Н2SO4 – обжигающее вещество.

  • Для приготовления стандарта мутности и бактериальной взвеси, подлежащей исследованию, подбираются пробирки одного диаметра.
  • В пробирки изготавливаемого стандарта разливается Н2SO4 в объеме, указанном в табл. 8.2, и к ней добавляется раствор ВаСl2 для получения общего объема 10 см3.
  • Пробирки с изготовленным стандартом тщательно закрыва­ются завинчивающимися пробками и заливаются сургучом.

При изготовлении исследуемой бактериальной суспензии необходимо проследить, чтобы жидкость в стандарте МсF и исследуемой пробирке была гомогенно мутной.

Количественная характеристика исследуемой микробной взвеси определяется сравнением с ближайшими по мутности пробирками тем же способом, как при использовании ОСО 42-28-85-02.

Таблица 8.2. Количественная оценка бактериальных взвесей по шкале МсРаНапс!

Номер по шкале МсF

Объем, см3

Приблизи­тельное количество, микроб/см3

Соответствующая микробная взвесь, х108/мл

Н2SO4 1 %

ВаСl2 1 %

0,5

9,95

0,05

1х108

1,5

1

9,9

0,1

3х108

3

2

9,8

0,2

6х108

6

3

9,7

0,3

9х108

9

4

9,6

0,4

12х108

12

5

9,5

0,5

15х108

15

6

9,4

0,6

18х108

18

7

9,3

0,7

21х108

21

8

9.2

0.8

24x108

24

9

9,1

0,9

27х108

27

10

9,0

1,0

30х108

30

 

[1] Последние две цифры в номере ОСО означают год его выпуска.

[2] Стандартный образец мутности ГНИИСК МБП им. ЛАТарасевича внесен в реестр отраслевых стандартных образцов медицинских иммуно­логических препаратов, допущенных к применению в системе Минздрава РФ и на предприятиях других ведомств, выпускающих иммунологические препараты.