Рецепт 84. Среда АГВ (Андреева, Гивинталь, Гриднева, Ведьмина)
Состав: г/л
Панкреатический гидролизат кильки или
Осветленный ферментолизат
кормовых дрожжей 20,0
Крахмал водорастворимый 5,0
Хлорид натрия (NaCl) 10,0
Гидроортофосфат натрия
(Na2HPO4) 1,0
Агар микробиологический 13,5
pH 7,4±0,2
Приготовление. Навеску препарата, указанную на этикетке, размешать в 1000 мл дистиллированной воды, довести до кипения, кипятить 2–3 мин до полного расплавления агара, профильтровать, стерилизовать при 121 °С в течение 20 мин. Горячую среду разлить по 20 мл в стерильные чашки Петри. После застывания среду подсушить при температуре 37 °С в течение 50–60 мин, соблюдая правила асептики. Готовую среду можно использовать в течение 6 дней при условии хранения ее при температуре 4–8 °С.
При определении чувствительности к антибиотикам гемоглобинофильных микроорганизмов перед розливом в чашки к среде добавляют 5 % стерильной дефибринированной крови животных и человека.
Посев исследуемого материала производят диско-диффузионным методом.

Рецепт 85. Среда Мюллера–Хинтона
Среда широко используется для определения чувствительности к антибиотикам и сульфаниламидам. Включение в состав среды специально отобранного агара дало возможность получать большие яркие зоны ингибирования, когда чувствительные микроорганизмы подвергаются действию антибиотиков и сульфаниламидов, диаметр которых соответствует показателям других стандартных сред. Для тестирования к сульфаниламидам бульонные культуры должны разводиться как минимум в 100 раз, так как сульфаниламиды могут находиться в антагонистических отношениях с ростовыми факторами бульонных культур, что позволяет чувствительным микроорганизмам давать хороший рост в присутствии бактериостатических концентраций исследуемого лекарства.
Методики, используемые для титрования чувствительности, включают качественный и полукачественный метод определения чувствительности.
При качественном методе исследуемая культура инокулируется на поверхность среды и учет результатов реакции определяется по регистрации зоны отсутствия микробного роста во¬круг дисков с антибиотиками после 18–20 ч инкубации в термостате.
Полуколичественный метод Ericsson, Bauer и соавт. (1966) использует диски, помещенные на стандартизованные среды известного объема и глубины в плоскодонном контейнере. Инокуляты тщательно отмериваются и засеваются на поверхность среды. После удаления избытка жидкости диски с антибиотиками помещаются на среду, и инкубационный период диффузии начинается прежде их инкубации в термостате.
После инкубации в термостате размеры зон ингибиции роста микробов сравниваются со стандартными графиками, полученными при тестировании большого числа микроорга-низмов. Результаты могут быть выражены в терминах чувствительность/резистентность или в виде величины MIC (МИК).
Агар Мюллера–Хинтона (Himedia, Mueller Hinton Agar, cat. M173)
Состав: г/л
Вытяжка говядины 300 мл
Кислотный гидролизат казеина 17,5
Крахмал 1,5
Агар 17,0
рН 7,4±0,2
Приготовление. Суспендировать 38,0 г перечисленных ингредиентов в 1000 мл дистиллированной воды. Кипятить до полного растворения. Стерилизовать автоклавированием при 121 °С в течение 15 мин.
Механизм действия. Среда поддерживает рост многих микроорганизмов. Крахмал служит "защитным коллоидом" против токсичных веществ, вырабатываемых в процессе роста. Очень успешно растут гонококки и менингококки.
Среда принята комитетом ВОЗ по стандартизации методов определения чувствительности микроорганизмов вследствие высокой восприимчивости результатов.
Рецепт 86. Диагностический агар для определения чувствительности (агар ДОИ) (Himedia, Diagnostic Sensitivity Jest Agar, cat. M502)
Диагностический агар для определения чувствительности рекомендован ВОЗ как среда для определения чувствительности к антибиотикам.
Состав: г/л
Протеазный пептон 10,0
Вытяжка из телятины 10,0
Декстроза 2,0
Натрия хлорид (NaCl) 3,0
Натрия фосфат двузамещенный 2,0
Аденина сульфат 0,01
Гуанина гидрохлорид 0,01
Урацил 0,01
Ксантин 0,01
Агар 15,0
Натрия ацетат 1,0
Аневрин 2,0
рН 7,4±0,2
Приготовление. Суспендировать 43 г коммерческой среды в 1000 мл дистиллированной воды. Нагреть до полного растворения, стерилизовать при 1 атм и 121 °С 15 мин.
Для приготовления кровяного агара охладить среду до 50 °С и асептически добавить 7 % стерильной лошадиной крови. Хорошо перемешать легкими вращательными движениями и разлить по чашкам.
Использование. Диагностический агар рекомендуется для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и химиопрепаратам, таким как сульфаниламиды. Микроорганизмы образуют хорошо выраженные зоны роста, обусловленные отсутствием создающих помехи веществ. Для менее требовательных микроорганизмов, таких как микро-кокки, сальмонеллы, шигеллы, колиформы и протеи, агар можно использовать без крови. Для более требовательных микробов, таких как Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis, гемолитические стрептококки α и β, обязательно обогащение кровью.
Определение чувствительности производится следующим образом. Поверхность среды засевается стерильным тампоном бульонной культурой тест-микроба. Диски с антибиотиками накладывают на равном расстоянии друг от друга на сухую засеянную среду и инкубируют при 37 °С 18 ч.
Отмечают и регистрируют зоны задержки роста.