Споры имеют вид образований круглой или овальной фор­мы, находящихся в теле микробной клетки. Различают три | вида расположения спор по отношению к длинной оси палочки: центральное – спора находится в центре тела микроба, субтерминальное – спора располагается ближе к одному из ее концов, терминальное – спора располагается на конце палочки. Диаметр споры может не превышать диаметр тела микробной клетки, вследствие чего форма палочки при спорообразо­вании не изменяется (бациллы). В других случаях диаметр споры больше поперечного размера микробной клетки и тело ее в месте образования споры утолщается (клостридии).

Форма, величина «расположение спор постоянны для каж­дого вида бацилл.

В отличие от вегетативной части клетки, споры содержат значительно меньше свободной воды и большое количество липидов и кальция. Плотная оболочка спор, непроницаемая для воды, окрашивается с большим трудом, поэтому при обыч­ных методах окраски споры имеют вид неокрашенных пустот внутри клетки. Для окраски спор пользуются специальными методами с применением протрав (кислоты или щелочи). Про­травы разрыхляют оболочку споры, облегчая проникновение в нее красителя. Окрасившиеся споры обладают кислотоустойчивостью, в отличие от вегетативного тела микробной клетки, обесцвечивающегося под действием кислоты. Поэтому прин­цип окраски спор и кислотоустойчивых бактерий одинаков: препарат окрашивают основным красителем, затем обесцвечи­вают кислотой и докрашивают дополнительно в какой-нибудь контрастный цвет.

6.5.1.       Окраска спор методом Ожешко

  • На высушенный нефиксированный препарат (мазок гото­вится толстым и на краю стекла) наливают несколько ка­пель 0,5 % раствора хлористоводородной кислоты и подо­гревают 1–2 мин над пламенем горелки до закипания, после чего остатки кислоты сливают;
  • остывший препарат промывают водой, подсушивают и фик­сируют на пламени горелки;
  • окрашивают карболовым фуксином Циля (рецепт 17) с по­догреванием до появления паров;
  • обесцвечивают 5 % раствором серной кислоты в течение нескольких секунд;
  • промывают водой;
  • докрашивают метиленовым синим Леффлера (синька Леффлера – рецепт 9) или 1 % водным раствором малахитового зеленого (рецепт 23) 3–5 мин.

Окрашенные споры имеют рубиново-красный цвет, вегета­тивные тела микробных клеток приобретают цвет дополнитель­ной краски – голубой при применении метиленового синего или зеленый при использовании малахитового зеленого.

6.5.2.       Окраска спор методом Пешкова

  • На фиксированный мазок наливают синьку Леффлера (ре­цепт 9), дают краске закипеть. Окрашивание мазка проис­ходит кипящей синькой в течение 20–30 с;
  • препарат промывают водой;
  • докрашивают 0,5 % водным раствором нейтральрот в течение 30–60 с (рецепт 25);
  • промывают водой и высушивают.

Споры, окрашенные синькой Леффлера, имеют голубой цвет, вегетативные тела бактерий – красный цвет.