Темнопольная микроскопия основана на способности мик­роорганизмов сильно рассеивать свет. Для темнопольной мик­роскопии пользуются обычными объективами и специальными темнопольными конденсорами.

Основная особенность темнопольных конденсоров заклю­чается в том, что центральная часть у них затемнена и прямые лучи от осветителя в объектив микроскопа не попадают. Объект освещается косыми боковыми лучами и в объектив I микроскопа попадают только лучи, рассеянные частицами, на­ходящимися в препарате. Темнопольная микроскопия основа­на на эффекте Тиндаля, известным примером которого служит обнаружение пылинок в воздухе при освещении их узким лучом солнечного света.

Чтобы в объектив не попадали прямые лучи от осветителя, апертура объектива должна быть меньше, чем апертура кон­денсора. Для уменьшения апертуры в обычный объектив по­мещают диафрагму или пользуются специальными объектива­ми, снабженными ирисовой диафрагмой.

При темнопольной микроскопии микроорганизмы выглядят ярко светящимися на черном фоне. При этом способе микро­скопии могут быть обнаружены мельчайшие микроорганизмы, размеры которых лежат за пределами разрешающей способнос­ти микроскопа. Однако темнопольная микроскопия позволяет увидеть только контуры объекта, но не дает возможности изу­чить его внутреннюю структуру.

С помощью темнопольной микроскопии изучают препараты типа "раздавленная капля". Предметные стекла должны быть не толще 1,1–1,2 мм, покровные – 0,17 мм, без царапин и загрязнений. При приготовлении препарата следует избегать Наличия пузырьков и крупных частиц (эти дефекты будут видны ярко светящимися и не позволят наблюдать микроорга­низмы).

Для темнопольной микроскопии применяют более мощные осветители и максимальный накал лампы.

Настройка темнопольного освещения в основном заключа­ется в следующем:

▲ устанавливают свет по Кёлеру;

  • заменяют светлопольный конденсор темнопольным;
  • на верхнюю линзу конденсора наносят иммерсионное масло или дистиллированную воду;
  • поднимают конденсор до соприкосновения с нижней по­верхностью предметного стекла;
  • объектив малого увеличения фокусируют на препарат;
  • с помощью центрировочных винтов переводят в центр поля зрения светлое пятно (иногда имеющее затемненный цент­ральный участок);
  • поднимая и опуская конденсор, добиваются исчезновения затемненного центрального участка и получения равномер­но освещенного светлого пятна. Если этого сделать не уда­ется, то надо проверить толщину предметного стекла (обыч­но такое явление наблюдается при использовании слишком толстых предметных стекол – конус света фокусируется в толще стекла). После правильной настройки света устанав­ливают объектив нужного увеличения и исследуют препарат.