При микроскопии неокрашенных микроорганизмов, отли­чающихся от окружающей среды только по показателю пре­ломления, изменения интенсивности света (амплитуды) не происходит, а изменяется только фаза прошедших световых волн. Поэтому глаз этих изменений заметить не может, и на­блюдаемые объекты выглядят малоконтрастными, прозрачны­ми. Для наблюдения таких объектов используют фазово-контрастную микроскопию, основанную на преобразовании неви­димых фазовых изменений, вносимых объектом, в амплитуд­ные, различимые глазом.

Фазово-контрастное устройство может быть установлено на любом световом микроскопе и состоит из: 1) набора объекти­вов со специальными фазовыми пластинками; 2) конденсора с поворачивающимся диском. В нем установлены кольцевые диафрагмы, соответствующие фазовым пластинкам в каждом из объективов; 3) вспомогательного микроскопа.

Настройка фазового контраста в основном заключается в следующем:

  • заменяют объективы и конденсор микроскопа на фазовые (обозначенные буквой Ф             или ph);
  • устанавливают объектив малого увеличения. Отверстие в диске конденсора должно быть без кольцевой диафрагмы (обозначено цифрой "0");
  • настраивают свет по Кёлеру;
  • выбирают фазовый объектив соответствующего увеличения и фокусируют его на препарат;
  • поворачивают диск конденсора и устанавливают соответст­вующую объективу кольцевую диафрагму;
  • вынимают из тубуса окуляр и вставляют на его место вспо­могательный микроскоп. Настраивают его так, чтобы были резко видны фазовая пластинка (в виде темного кольца) и кольцевая диафрагма (в виде светлого кольца того же диа­метра). С помощью регулировочных винтов на конденсоре совмещают эти кольца. Вынимают вспомогательный микро­скоп и вновь устанавливают окуляр.

Благодаря применению этого способа микроскопии кон­траст живых неокрашенных микроорганизмов резко увеличи­вается, и они выглядят темными на светлом фоне (позитивный фазовый контраст) или светлыми на темном фоне (негативный фазовый контраст). В России выпускают устройство КФ-4 для позитивного фазового контраста.

Фазово-контрастная микроскопия применяется также для изучения клеток культуры ткани, наблюдения действия различ­ных вирусов на клетки и т.п. В этих случаях часто применяют биологические микроскопы с обратным расположением оптики – так называемые инвертированные микроскопы. У таких микро­скопов объективы расположены снизу, а конденсор – сверху.