Метод определения степени токсичности почв для микро­организмов используется в качестве быстрого и достаточно чувствительного теста для получения ориентировочных данных о способности почвы самоочищаться от патогенных и санитар­но-показательных микроорганизмов. Кроме того, этот тест оказался также чувствительным для определения влияния хи­мических веществ на почвенный микробиоценоз. Низкая сте­пень токсичности или ее снижение по отношению к патоген­ным микроорганизмам свидетельствуют о наличии или возник­новении условий для выживания возбудителей в таких почвах. Это явление неблагоприятное.

Для определения токсичности почв можно использовать два метода – качественный и качественно-количественный.

Качественный метод определения токсичности почв. На поло­вину дна стерильной чашки Петри ровным слоем распределяют 10 г перемешанной и просеянной почвы. На дне и крышке чашки записывают номер пробы по журналу и тест-микроор­ганизм. Затем чашки переносят в бокс, устанавливают на ров­ной поверхности и заливают 1,5 % голодным агаром (рецепт 94) в количестве 10 мл с таким расчетом, чтобы он покрыл слой почвы. После его застывания в чашки вносят питатель­ный агар в таком же количестве, адекватный тест-микроорга­низмам. Из одного почвенного образца готовят две параллель­ные чашки для каждого микроорганизма. Чашки высушивают под бактерицидными лампами в течение 30 мин. Затем произ­водится посев индикаторных штаммов микроорганизмов.

В качестве контроля производят посевы тех же культур на аналогичные среды, но без почвы.

Условия инкубации посевов зависят от вида индикаторного микроорганизма. Учет результатов начинают с просмотра кон­трольного посева. В случае равномерного роста тест-микроба на всей поверхности агаровой пластинки просматривают ос­тальные чашки с посевами. Колонии идентифицируют по "форме роста". Из каждой серии посевов снимают колонии и производят их идентификацию.

Рост колоний только на участке агаровой пластинки, под которой нет почвы, указывает на токсичность (Т) исследуемого образа почвы.

При исследовании некоторых почвенных проб отмечают частичное ингибирование роста тест-микроба. В этих случаях регистрируют маловыраженную токсичность (М/Т).

Качественно-количественный метод определения токсичности почв. В стерильную чашку Петри вносят 10 г почвы и распре­деляют равномерно по всей поверхности, затем, как и при качественном методе, вносят непитательный и питательный агар. В качестве дополнительного барьера между почвой и индикаторным штаммом на поверхности питательной среды укладывают мембранный фильтр.

На матовую поверхность мембранных фильтров простым карандашом наносят 16 точек, после чего фильтр стерилизуют кипячением. Затем на питательную среду помещают мембран­ные фильтры (матовой поверхностью вверх) в количестве от 1 до 4 на одну чашку. На поверхность фильтра в местах, отмеченных точками, производят посев бактериальной петлей (иглой) культуры индикаторного штамма, суспензированного в изотоническом растворе натрия хлорида до содержания 100 млн бактериальных клеток в 1 мл по оптическому стандарту мут­ности. Эта манипуляция упрощается при использовании спе­циального штампа в виде металлического диска диаметром около 30 мм. В диск вмонтированы 16 стальных игл строго одинаковой длины и толщины. Культуры микроорганизмов наливают в чашки Петри и погружают в них кончики игл стерильного штампа, а затем одновременно производят посев в 16 точках мембранного фильтра. Посевы инкубируют в термостате или анаэростате при оптимальной температуре и продолжительности в зависимости от физиологических осо­бенностей индикаторного штамма.

Учет результатов производят путем подсчета выросших ко­лоний в точках посева. Процент пророста (Р) высчитывается как отношение количества образовавшихся колоний к количе­ству посевов. Токсичность определяется по формуле: Т=100–Р. Этим методом, как и качественным, устанавливают абсолют­ную токсичность, если на фильтрах не вырастает ни одна колония; отсутствие токсичности – на метках всех посевов вырастают колонии, токсичности различной степени – когда прорастает только часть засеянных точек.