Сульфитредуцирующие клостридий – это спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, редуцирующие сульфит натрия на железосульфитном агаре при температуре 44±1 °С в течение 16–18 ч.

Метод основан на выращивании посевов в железосульфит­ном агаре (рецепт 101) в условиях, приближенных к анаэроб­ным, и подсчете числа черных колоний.

Первый день. Прогревают на водяной бане пробы воды по 20 мл в пробирках при температуре 75±5 °С в течение 15 мин для исключения вегетативных форм. При исследовании хлори­рованной воды прогревание проб не производят.

Из каждой пробы питьевой воды делают посев или фильт­руют 20 мл. При необходимости подбирают объемы с таким расчетом, чтобы в посевах (на фильтрах) выросло не более 10–15 колоний.

Перед посевом пробирки с железосульфитным агаром рас­плавляют на водяной бане (не кипятить!). При посеве поддер­живают среду нагретой до 70–80 °С на водяной бане.

При этом можно пользоваться следующими методическими приемами.

Метод фильтрования в пробирках. После фильтрования 20 мл воды мембранный фильтр фламбированным пинцетом берут за два противоположных края и согнутым в виде трубочки поме­щают в пробирку с горячим железосульфитным агаром. Сто­рона фильтра с осевшими бактериями обращена внутрь. При этом фильтр распрямляется и располагается по стенке пробирки.

Пробирку с железосульфитным агаром и фильтром для со­здания анаэробных условий быстро охлаждают, помещая в емкость с холодной водой. Культивируют посевы при 44±1 °С в течение 16–18 ч.

Метод фильтрования в чашках Петри. Чашки диаметром 55–60 мм заливают железосульфитным агаром тонким слоем. После застудневания очага фильтрации помещают фильтр по­верхностью, на которой осели бактерии, на питательную среду так, чтобы под ним не было пузырьков воздуха. Затем расплав­ленный железосульфитный агар заливают до верхнего края чаш­ки, чтобы крышка плотно прилегала к среде для создания анаэ­робных условий. Культивируют посевы при 44±1 °С в течение 16-18 ч.

Метод прямого посева. Проба воды разливается в стерильные пробирки:

  • по 10 мл в 2 пробирки (объемом не менее 30 мл) или
  • по 5 мл в 4 пробирки (объемом по 20 мл).

Посевы заливают горячим железосульфитным агаром по стенке пробирки, избегая образования пузырьков воздуха, в количестве, превышающем объем воды в 2 раза. После этого пробирки быстро охлаждают, помещая их в емкость с холодной водой для создания анаэробных условий. Посевы инкубируют при 44±1 °С в течение 16–18 ч.

Второй день. Проводят учет результатов анализа. Подсчи­тывают черные колонии, выросшие как на фильтрах, так и в толще питательной среды. Результат анализа выражают числом КОЕ спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды.