В лабораторной практике приняты способы умерщвления, которые характеризуются простотой приемов и вызывают бы­струю смерть животного. Мышей, крыс, морских свинок по­мещают в стеклянную, плотно закрывающуюся банку с кусоч­ком ваты, пропитанным хлороформом или эфиром. Животные засыпают и гибнут в течение 3–5 мин. Кроликов умерщвляют посредством воздушной эмболии. Для этого в краевую вену уха по направлению к его основанию вводят иглу шприца. Появ­ление капельки крови свидетельствует о том, что игла нахо­дится в вене. После этого иглу соединяют с пустым 10-грам­мовым шприцем, поршень которого вытянут до конца. При надавливании на поршень в кровеносную систему животного поступает находящийся в цилиндре шприца воздух, вызывая эмболию и быструю смерть. Забой животных проводят в экс­периментальной комнате в отсутствие других здоровых или подопытных животных.

Вскрытие животных. Трупы лабораторных животных вскры­вают с целью выяснения причин гибели, выделения введенного возбудителя, выявления механизма распространения микробов в организме и места их локализации, изучения патологоанато-мических изменений, наступающих в результате перенесенной инфекции. Вскрытие трупов животных производят стерильны­ми инструментами, соблюдая правила асептики.

На столе должны находиться: стакан, наполненный до по­ловины спиртом, стерильные ножницы, скальпель, анатоми­ческие и хирургические пинцеты, бактериологическая петля, стерильные чашки Петри, пробирки и чашки с питательными средами, стерильные пастеровские пипетки, предметные стек­ла, стерильный изотонический раствор хлорида натрия, банка с дезинфицирующим раствором, ватные тампоны, спички и горелки (спиртовая или газовая). Вскрытие трупов следует про­изводить таким образом, чтобы предупредить внесение микро­организмов с поверхности в глубину тканей и перенос микробов из одного органа в другой. С этой целью рекомендуется вскрывать животных в атональном состоянии, усыпив их эфи­ром, или тотчас после наступления смерти, так как в ближай­шие часы после нее проницаемость тканей нарушается и бак­терии из одного органа могут проникнуть в другой. Особую опасность в этом отношении представляет кишечник, содер­жимое которого изобилует микробами.

Труп животного брюшком кверху кладут на деревянную доску или лоток с пластинкой застывшего парафина, растяги­вают пинцетом все четыре лапы и в таком положении фикси­руют их булавками или небольшими острыми гвоздиками к поверхности дерева или парафина. Грудь и брюшко протирают ватой, смоченной 5 % раствором хлорамина или спиртом, под­жигают шерсть, чтобы содержащиеся на ней микробы, в том числе спороносные палочки, не разлетались и не загрязняли стерильные инструменты и органы вскрытого трупа. В процес­се вскрытия придерживаются общепринятого порядка. Сначала исследуют наружные покровы и подкожную клетчатку, затем проводят вскрытие, исследование и взятие материала из орга­нов грудной полости, а в последнюю очередь – вскрытие, ис­следование и взятие материала из органов брюшной полости.

Обработанную кожу разрезают по средней линии живота протяженностью от симфиза до грудиноключичного сочлене­ния. На уровне передних и задних лап делают боковые надре­зы. Кожные лоскуты отсепаровывают от подкожной клетчатки и отворачивают в стороны, прикалывая булавками к доске.

В протоколе вскрытия отмечают состояние подкожной клет­чатки и лимфатических узлов в паху и подмышечных впадинах. Подкожная клетчатка может быть развита сильно, слабо или умеренно. Подмышечные и паховые узлы обнаруживаются лег­ко. При осмотре узлов обращают внимание на их величину, форму и цвет. Для бактериологического исследования лимфа­тические узлы раздавливают стерильным пинцетом и погружа­ют в жидкую питательную среду или втирают в поверхность плотной питательной среды.

Сменив или простерилизовав использованные для вскрытия кожных покровов инструменты, приступают к вскрытию груд­ной клетки. Грудину, захваченную пинцетом, слегка припод­нимают, делают под ней небольшой надрез, вводят в него браншу ножниц и перерезают ребра вначале с одной, а затем - с другой стороны. Если в грудной полости есть экссудат, из него делают мазки и посев. Вновь сменив ножницы или про­терев их ватой, смоченной спиртом, разрезают перикард, об­нажая поверхность сердца. Накаливают на пламени горелки бранши пинцета или скальпель, прижигают поверхность серд­ца, затем стерильным пинцетом оттягивают кверху ушко пра­вого предсердия и после этого через прижженное место вводят в полость желудочка или предсердия капилляр пастеровской пипетки. Кровь, поднявшуюся по капилляру пипетки, засевают в питательную среду.

Далее приступают к осмотру органов, расположенных в грудной полости, регистрируя в протоколе имеющиеся в них изменения, например наличие экссудата в полости плевры, абсцессы, гиперемию (багрово-красное окрашивание) или, на­оборот, ишемию (малокровие) в легких. Кусочки легкого с выявленными в нем изменениями вырезают для бактериоло­гического исследования.

После этого, сменив инструменты, переходят к исследова­нию органов брюшной полости. Передний листок брюшины вскрывают ножницами. При наличии экссудата в брюшной полости делают из него мазок и производят посев в питатель­ную среду. Затем осматривают печень, селезенку, почки, отме­чая цвет, величину органов, характеризуя их консистенцию (нормальная, дряблая, уплотненная, хрупкая) и имеющиеся очаги поражения, например абсцессы.

При локализации инфекционного процесса в желудочно-кишечном тракте делают посев содержимого желудка и кишеч­ника, набирая его в пастеровскую пипетку через прижженную желудочную и кишечную стенки. Таким же образом для посева берут экссудат, содержимое абсцессов, желчного и мочевого пузыря.

Из паренхиматозных органов (печень, почки, селезенка) взятие материала и засев его производят одним из следующих способов.

  • У стерильной пастеровской пипетки обламывают кончик и проводят ее через пламя горелки. Затем капилляром пипет­ки прокалывают прижженный участок исследуемого органа и набирают в нее тканевую жидкость, которую засевают в питательную среду. Пипетки после использования опускают в банку с дезинфицирующим раствором.
  • Прижженную поверхность органа надрезают стерильным скальпелем и из глубины надреза соскабливают бактериаль­ной петлей небольшое количество материала, которое затем вносят в питательную среду.
  • На прижженной поверхности органа делают надрез, остро­конечными ножницами из глубины его вырезают маленький кусочек, раздавливают между браншами пинцета и опускают в жидкую питательную среду или срезом кусочка делают отпечатки на поверхности плотной питательной среды.

Изменения, обнаруженные при вскрытии трупа, а также результаты бактериологического исследования вносят в прото­кол вскрытия и бактериологического исследования трупного материала, составленный примерно по такому образцу:

  • вид лабораторного животного, взятого в опыт;
  • время заражения (месяц, число, час);
  • материал, примененный для заражения (взвесь микробов с плотной питательной среды, бульонная культура, взвесь па­тологического материала и т.д.);
  • время гибели животного (месяц, число, час);
  • изменения, обнаруженные при вскрытии животного в месте введения заразного материала, состояние подкожной клет­чатки, лимфатических узлов, изменения, найденные во внутренних органах;
  • вид микроба, выделенного из трупного материала, его ос­новные морфологические, культуральные, биохимические и серологические свойства.

После вскрытия трупы животных складывают в металличес­кие бачки с плотно закрывающимися крышками и засыпают сухой хлорной известью. Трупы мелких лабораторных живот­ных можно заливать раствором различных дезинфицирующих веществ: 5 % раствором карболовой кислоты, 3–5 % мыльно-карболовым раствором, 3–5% раствором хлорамина. Трупы животных, погибших от заражения споровыми формами мик­робов, заливают хлорноизвестковым молоком или 5–10 % ос­ветленным раствором хлорной извести. В дезинфицирующем веществе трупы животных хранят до момента их сжигания.