Благодаря специфичности действия бактериофаги исполь­зуются для диагностики инфекционных заболеваний, опреде­ления видовой принадлежности возбудителя, идентификации бактерий из объектов внешней среды. Фаготипирование позво­ляет проводить внутривидовую дифференциацию бактерий. Поскольку фаготиповая характеристика бактериальных штам­мов достаточно стабильна, фаготипирование чрезвычайно зна­чимо для проведения эпидемиологического анализа. С помо­щью фагового маркирования представляется возможность ус­тановления связей между отдельными случаями заболевания и выявления источников инфекции, путей ее распространения.

Разработаны различные схемы для фагодиагностики и фаготипирования многих видов бактерий – возбудителей брюш­ного тифа, паратифов А и В, дизентерии, сальмонеллезов, дифтерии, чумы, холеры, бруцеллеза, для энтеропатогенной кишечной палочки, стафилококков, стрептококков, микобактерий и др. Существуют международные схемы фаготипирования для возбудителей брюшного тифа, паратифов А и В, коа-гулазоположительных стафилококков.

Фаготипирование стафилококков. Широкое распространение при изучении стафилококковых инфекций получили диагнос­тические стафилококковые бактериофаги для типирования коагулазопозитивных стафилококков, выделенных от человека (Международный набор – Англия) и от крупного рогатого скота (набор Давидсона). Эти наборы содержат соответственно 23 и 7 типов бактериофагов. Типирование осуществляется всеми фагами набора одновременно.

Лиофилизированное содержимое каждой ампулы с типовым фагом растворяют в 1 мл бульона Хоттингера, Мартена или мясопептонного бульона с 0,4 % глюкозы и 0,02 % хлористого кальция – основное разведение 10-1. Далее готовят разведе­ния, соответствующие 1 тест-разведению (ТР) и 100 ТР. Су­точную агаровую культуру испытуемого штамма засевают в пробирку с мясопептонным бульоном (можно использовать бульон Хоттингера или Мартена), рН 7,2–7,4 и выращивают при 37°С до появления заметной мути (3–5 ч). По чашкам Петри разливают 1,2 % агар Хоттингера на свежей мясной воде с добавлением 0,4 % глюкозы и 0,02 % хлористого кальция (последний добавляют непосредственно к готовой расплавлен­ной среде перед розливом по чашкам).

Чашки с застывшим агаром подсушивают 40–60 мин при 37 °С. С помощью пастеровской пипетки бульонной культурой орошают поверхность агара. Избыток культуры удаляют и под­сушивают 30–40 мин при 37 °С. Дно засеянной чашки расчер­чивают в соответствии с количеством используемых фагов и в каждую часть засеянной среды в определенном порядке нано­сят каплю соответствующего фага тонко оттянутой пастеров­ской пипеткой. После подсыхания капель фагов чашку пере­ворачивают и инкубируют 18–20 ч при 30 °С или 5 – 6 ч при 37 °С и оставляют при комнатной температуре на 18–20 ч.

Учет и регистрация результатов. Степень лизиса культуры стафилококка регистрируется по следующей схеме:

+ + + +

– сливной (полный) лизис;

+ + +

– полусливной (незначительный рост культуры в зоне лизиса);

+ +

– наличие в месте нанесения капли фага свыше 50 колоний фага (пятен лизиса);

+

– от 20 до 50 колоний фага;

±

– менее 20 колоний фага;

– полное отсутствие лизиса.

Первые три степени лизиса (+ + + +, + + +, + +) называют сильной реакцией. Степень лизиса (+, ±) – слабая реакция.

Штамм стафилококка считается типируемым, если хотя бы один фаг дал сильную реакцию. Если при типировании 1 ТР получены только слабые реакции или лизис отсутствует, то этот штамм исследуют повторно с теми же фагами в разведе­нии 100 ТР.

Стафилококки чаще лизируются несколькими фагами, что позволяет определить характерную для каждого штамма фаго-мозаику. Если штаммы обнаруживают одну фагомозаику или имеется различие на одну или две сильные реакции, то они идентичны.

Фагодиагностика холеры. В нашей стране выпускают бак-териофаги для диагностики возбудителей холеры: а) дифферен­циально-диагностические фаги для дифференциации холерных вибрионов; б) диагностические фаги для дифференциации хо­лерных вибрионов 01 группы биоваров V. cholerae cholerae и V. cholerae eltor, в) диагностические холерные бактериофаги ТЭПВ – 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 – для фаготипирования и фагодиагностики неагглютинирующих холерной 01 сывороткой энтеро-патогенных вибрионов (Cholerae поп 01), выделенных от людей и из объектов внешней среды; г) диагностические холерные монофаги для определения вирулентности вибрионов Эль-Тор, выделенных от носителей и из объектов внешней среды; д) диа­гностические холерные бактериофаги СТХ + СТХ – для диф­ференциации вирулентных и авирулентных штаммов холерных вибрионов.