Обнаружение бактериофага в жидкой питательной среде. Два сосуда (пробирки или колбы) с питательными средами засева­ют одной и той же культурой микроба, гомологичного иско­мому фагу. Одновременно с посевом или после 3–4-часового инкубирования в термостате в один из сосудов (опытный) вносят фильтрат исследуемого материала. Второй сосуд, содер­жащий питательную среду, засеянную культурой микробов, является контролем. Оба сосуда ставят в термостат при 37°С и через 24 ч учитывают результаты.

При учете результатов возможны следующие варианты:

  • содержимое опытного сосуда прозрачно, в контроле – по­мутнение питательной среды. Полученные данные указыва­ют на содержание в исследуемом фильтрате бактериофага высокой активности;
  • в опытном сосуде имеется менее выраженное по сравнению с контролем помутнение среды, что свидетельствует о со­держании в исследуемом материале бактериофага средней активности;
  • при одинаковом помутнении в обоих сосудах для оконча­тельного заключения об отсутствии бактериофага необходи­мо дополнительное исследование: высев на плотную пита­тельную среду содержимого опытной и контрольной проби­рок. Высев делают на среду в чашки Петри шпателем, чтобы получить сплошной рост микробов. Чашки ставят в термо­стат и после 24 ч инкубирования при 37 °С учитывают результаты. Посев из контрольного сосуда дает сплошной рост микробов. При наличии фага в исследуемом материале на фоне сплошного роста микробов появляются стерильные пятна – колонии бактериофага.

Обнаружение бактериофага на плотных питательных средах по методу Отто. Мясопептонный 1,5 % агар разливают в чашки Петри (более высокая концентрация агара угнетает развитие негативных колоний бактериофага). Чашки с агаром, хорошо подсушенные, засевают 3–6-часовой бульонной культурой или смывом с суточной агаровой культуры бактерий, гомологичных искомому фагу. Для получения сплошного роста 2–3 капли культуры, нанесенные в центре чашки, растирают шпателем равномерно по всей ее площади или аккуратно распределяют бульонную культуру (около 2 мл) по поверхности чашки, из­быток удаляют пипеткой. Затем 30 – 40 мин подсушивают при 37°С, накрыв стерильным бумажным фильтром. На подсушен­ную поверхность посева наносят каплями исследуемый фильт­рат. На одной чашке можно поставить несколько проб. Для этого по дну чашки намечают разделение питательной среды на секторы и в каждый сектор вносят по калле фильтрата. После того как жидкость впитается в среду, чашки перевора­чивают вверх дном и ставят в термостат при 37 °С на 18–24 ч.

Учет результатов доказательством наличия бактериофага слу­жит отсутствие роста культуры в месте попадания капли фильт­рата (активный бактериофаг) или появление в этом участке мелких стерильных пятен – колоний бактериофага (бактерио­фаг слабой активности).

Обнаружение бактериофага на плотных питательных средах двухслойным методом Грациа. Мясопептонный 1,5 % агар раз­ливают в чашки Петри в количестве 25–30 мл (первый слой). После застудневания среды чашки ставят на 1,5–2 ч для под­сыхания. В пробирку с 2,5 мл 0,7% расплавленного и осту­женного до температуры 45 °С агара вносят 1 мл исследуемого фильтрата и 0,1 мл густого смыва суточной агаровой культуры, соответствующей искомому фагу. Содержимое пробирок бы­стро перемешивают, чтобы не произошло застудневания агара, и выливают в ту же чашку вторым слоем. После застудневания агара посев ставят в термостат при 37°С. Учет результатов, как правило, возможен через 18–20 ч инкубации в термостате. Присутствие бактериофага определяют по наличию прозрач­ных пятен, хорошо видимых на матовом фоне глубинного роста бактерий.