Контроль качества исследований антибиотикорезистентнос­ти основан на параллельной оценке клинических и контроль­ных (референсных) штаммов. Референсные штаммы характе­ризуются генетической стабильностью по основным показателям, в том числе и по уровню чувствительности к антибио­тикам. Величины МПК препаратов и диаметры зон ингибиции роста вокруг дисков с соответствующими антибиотиками для контрольных штаммов находятся в достаточно жестких преде­лах.

Если при оценке чувствительности контрольного штамма величина МПК или диаметр зоны ингибиции роста выходит за пределы значений, представленных в табл. 10.4 и 10.5, то это свидетельствует либо о наличии методических ошибок на каком-то этапе постановки исследования, либо о недостаточ­ном качестве используемых питательных сред и реактивов. Результаты исследования чувствительности клинических штам­мов в этом случае следует считать недостоверными. Необходимо тщательно проанализировать все этапы проведения исследова­ния и проверить качество питательных сред и реактивов.

Таблица 10.4. Значения величин МПК (мкг/мл) для референсных штаммов микроорганизмов с обычными питательными потребнос­тями

Антибиотик

S.aureus    АТСС 29213

E.faecalis АТСС 29212

Е.соli       АТСС 25922

Р.аеruginosa АТСС 27853

Бензилпенициллин

0,25-1

1-4

Ампициллин

0,25-1

0,5-2

2-8

Ампициллин/сульбактам

_

 

2/1-8/4

_

Оксациллин

0,12-0,5

8-32

Карбенициллин

2-8

16-64

4. 16

16-64

Тикарциллин

2-8

16-64

2-8

8-32

Тикарциллин/кла-вуланат

0,5/2-2/2

16/2-64/2

2/2-8/2

8/2-32/2

Азлоциллин

2-8

1-4

8-32

2-8

Мезлоциллин

1-4

1-4

2-8

8-32

Пиперациллин

1-4

1-4

1-4

1-4

Пиперациллин/та-зобактам

0,25/4-2/4

1/4–4/4

1/4-4/4

1/4-8/4

Цефазолин

0,25-1

1-4

Цефалотин

0,12-0,5

4-16

Цефаклор

1-4

1-4

Цефамандол

0,25-1

0,25-1

Цефуроксим

0,5-2

2-8

 

Цефокситин

1-4

1–4

Цефотетан

4-16

0,06-0,25

Цефиксим

8-32

0,25-1

Цефподоксим

1-8

0,25-1

Цефтибутен

0,12-0,5

Цефоперазон

1-4

0,12-0,5

2–8

Цефотаксим

1-4

0,03-0,12

8-32

Цефтазидим

4–16

0,06-0,5

1-4

Цефтриаксон

1-8

0,03-0,12

8-32

Цефепим

1-4

0,015-0,06

1-4

Азтреонам

0,06-0,25

2-8

Имипенем

0,015–0,06

0,5-2

0,06-0,25

1-4

Меропенем

0,03-0,125

2-8

0,008-0,06

0,25-1

Налидиксовая кислота

1-4

Циноксацин

2-8

Эноксацин

0,5-2

2-16

0,06-0,25

2-8

Норфлоксацин

0,5-2

2-8

0,03-0,12

1-4

Ципрофлоксацин

0,12-0,25

0,25-2

0,004-0,015

0,25-1

Офлоксацин

0,12-1

1-4

0,015-0,12

1-8

Ломефлоксацин

0,25-2

2-8

0,03-0,12

1-4

Амикацин

1-4

64-256

0,5-4

1-4

Гентамицин

0,12-1

4-16

0,25-1

0,5-2

Нетилмицин

<0,25

4-16

<0,5–1

0,5-8

Тобрамицин

0,12-1

8-32

0,25-1

0,25-1

Канамицин

1-4

16-64

1-4

Эритромицин

0,12-0,5

1-4

Азитромицин

0,5-2

Кларитромицин

0,12-0,5

Клиндамицин

0,06-0,25

4-16

Хлорамфеникол

2-8

4-16

2-8

Тетрациклин

0,25-1

8-32

0,5-2

8-32

Рифампин

0,004-0,015

0,5-4

4-16

16-64

Нитрофурантоин

8-32

4-16

4-16

Ко-тримоксазол (1/19)

<0,5/9,5

<0,5/9,5

<0,5/9,5

8/152– 32/608

Ванкомицин

0,5-2

1-4

Примечание. Данные приведены для методов серийных микроразведе­ний в бульоне.

Таблица 10.5. Значения величин диаметров зон ингибиции роста (мм) для референсных штаммов микроорганизмов с обычными пи­тательными потребностями

Антибиотик

Содержа­ние в диске, мкг

E.coli АТСС 25922

S.aureus АТСС 25923

P.aeruginosa АТСС 27853

Бензилпенициллин

6 (10ЕД)

26-37

Ампициллин

10

16-22

27-35

Ампициллин/суль-бактам

10/10

20-24

29-37

Оксациллин

1

18-24

Карбенициллин

100

23-29

18-24

Тикарциллин

75

24-30

22-28

Тикарциллин/кла-вуланат

75/10

25-29

29-37

20-28

Азлоциллин

75

24-30

Мезлоциллин

75

23-29

19-25

Пиперациллин

100

24-30

25-33

Пиперациллин/ тазобактам

100/10

24-30

27-36

25-33

Цефазолин

30

23-29

29-35

Цефалотин

30

15-21

29-37

Цефаклор

30

23-27

27-31

Цсфамандол

30

26-32

26-34

Цефуроксим

30

20-26

27-35

Цефокситин

30

23-29

23-29

Цефотетан

30

28-34

17-23

Цефиксим

5

23-27

Цефподоксим

10

23-28

19-25

Цефтибутен

30

27-35

Цефоперазон

75

28-34

24-33

23-29

Цефотаксим

30

29-35

25-31

Цефтазидим

30

25-32

16-20

22-29

Цефтриаксон

30

29-35

22-28

17-23

Цефепим

30

29-35

23-29

24-30

Азтреонам

30

28-36

23-29

Имипенем

10

26-32

20-28

Меропенем

10

28-34

29-37

27-33

Налидиксовая кислота

30

22-28

Циноксацин

100

26-32

Эноксацин

10

28-36

22-28

22-28

Норфлоксацин

10

28-35

17-28

22-29

Ципрофлоксацин

5

30-40

22-30

25-33

Офлоксацин

5

29-33

24-28

17-21

Ломефлоксацин

10

27-33

23-29

22-28

Амикацин

30

19-26

20-26

18-26

Гентамицин

10

19-26

19-27

16-21

Нетилмицин

30

22-30

22-31

17-23

Тобрамицин

10

18-26

19-29

19-25

Канамицин

30

17-25

19-26

Эритромицин

15

–          

22-30

Азитромицин

15

21-26

Кларитромицин

15

26-32

Клиндамицин

2

24-30

Хлорамфеникол

30

21-27

19-26

Тетрациклин

30

18-25

24-30

Доксициклин

30

18-24

23-29

Рифампин

5

8-10

26-34

 

Нитрофурантоин

300

20-25

18-22

Ко-тримоксазол (1/19)

1,25/ 23,75

24-32

24-32

 

Ванкомицин

30

17-21

Выбор референсных штаммов для проведения контрольных исследований определяется видом исследуемого микроорга­низма. При контроле качества оценки антибиотикочувстви­тельности отдельных групп микроорганизмов необходимо ис­пользовать следующие контрольные штаммы:

  • Staphylococcus spp.– S.aureus АТСС 29213 – для методов се­рийных разведений и АТСС 25923 – для диско-диффузион­ного (рис. 10.5 – см. вклейку).
  • Enterococcus spp. – E.faecalis АТСС 29212 – для метода се­рийных разведений и скрининга на высокий уровень резис­тентности к аминогликозидам; S.aureus АТСС 25923 – для диско-диффузионного.
  • Enterobacteriaceae – E.coli АТСС 25922.
  • Pseudomonas spp., Acinetobacter spp. и другие неферментирую-щие – P.aeruginosa АТСС 27853 (рис. 10.6 – см. вклейку).

Исследования по контролю качества оценки антибиотико­чувствительности рекомендуется проводить не реже 1 раза в неделю.

Методы контроля качества питательных сред. Качество пи­тательной среды является одним из критических параметров для проведения корректной оценки антибиотикорезистентности. Важнейшими показателями качества питательной среды являются концентрации двухвалентных катионов Са2+ и Mg2+, влияющих на активность аминогликозидных антибиотиков и тетрациклинов, а также тимина и тимидина, являющихся ан­тагонистами сульфаниламидных препаратов и триметоприма.

В международной практике основной средой, используемой во всех методах оценки антибиотикорезистентности, является среда Mueller–Hinton и др. (рецепты 85, 86)). Рассматриваемые в последующих разделах критерии величины МПК, позволяю­щие отнести исследуемые микроорганизмы к одной из кате­горий: "чувствительные", "устойчивые" или "промежуточ­ные", – разработаны именно для среды Mueller–Hinton.

Следует признать возможность использования для оценки антибиотикорезистентности и других сред, например АГВ, в том случае если они удовлетворяют описанным ниже требованиям.

Перед использованием в экспериментах по оценке антибио­тикорезистентности каждая новая партия среды (Mueller–Hin­ton или какой-либо другой) должна пройти контроль качества в соответствии с описанным ниже методом.

Определение pH среды проводят после автоклавирования, внесения всех необходимых добавок и охлаждения до комнат­ной температуры (25 °С); приемлемый диапазон 7,2–7,4. При величине pH среды, выходящей за указанные пределы, возмож­ны существенные изменения в величине МПК.

Контроль катионного состава. Для получения воспроизводимых результатов оценки антибиотикорезистентности питательная сре­да должна содержать Са2+ 20–25 мг/л и Mg2+ 10–12,5мг/л. Применение метода атомной абсорбционной спектрофотометрии для непосредственной оценки концентрации двух­валентных катионов в среде в повседневной практике малоре­ально.

Наиболее доступным интегральным методом оценки каче­ства сред (как жидких, так и агаризованных) является сопо­ставление экспериментально полученной величины МПК ре-ференсных штаммов микроорганизмов с этим показателем, приведенным в их паспортной характеристике.

Наиболее подходящим штаммом для оценки качества жид­ких и плотных питательных сред, предназначенных для изуче­ния антибиотикорезистентности, является штамм Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853. Среду следует считать удовлетворитель­ной по качеству, если величина МПК гентамицина находится в пределах 0,5–2,0 мкг/мл. Выбор гентамицина для контроля качества связан с тем, что аминогликозидные антибиотики наиболее чувствительны к колебаниям концентрации двухва­лентных катионов.

Для контроля на наличие антагонистов сульфаниламидных препаратов и триметоприма рекомендуется использовать штамм Enterococcus faecalis АТСС 29212. При величине МПК триметоприма/сульфаметоксазола <0,5/9,5мкг/мл среду следу­ет признать удовлетворительной по качеству.

Определение величины МПК антибиотиков (или диаметров зон ингибиции роста) в отношении референсных штаммов в целях контроля качества среды проводят в. соответствии с опи­санными выше методами.