Как отмечено выше, все работы по обоснованию критериев чувствительности проводят с использованием стандартизован­ного метода серийных разведений. Необходимость стандарти­зации связана с тем, что при различных условиях культивиро­вания микроорганизмов величина МПК антибактериальных препаратов и диаметры зон задержки роста могут изменяться. Очевидно, что как на этапе разработки критериев чувствитель­ности, так и при проведении исследований в практических целях используемые методы должны обеспечивать полную вос­производимость результатов.

При использовании принятых значений пограничных кон­центраций и диаметров зон ингибиции роста даже незначи­тельные отклонения от условий проведения исследований мо­гут привести к получению ошибочных результатов. Например, если в стандартных условиях МПК препарата "X" в отношении микроорганизма "Y" составляет "Z", то при изменении усло­вий проведения исследований эта величина может составить "2Z", в результате штамм будет ошибочно оценен не как "чувствительный", а как "промежуточный" или "устойчивый".

Стандартизация методов оценки антибиотикочувствитель­ности осуществляется по следующим параметрам:

  • • состав питательной среды:
  • ионы Са2+ и Mg2+ являются антагонистами некоторых АБП, при повышении концентрации этих ионов величи­на МПК может существенно повышаться. В стандартных питательных средах концентрация ионов должна состав­лять: Са2+ 20-25 мг/л и Mg2+ 10-12,5 мг/л;
  • концентрация питательных веществ непосредственным образом влияет на скорость роста и метаболическую ак­тивность микроорганизмов. Чем среда богаче питатель­ными веществами, тем выше скорость роста микроорга­низмов и соответственно меньше диаметр зоны ингиби­ции роста и выше значение МПК;
  • наиболее подходящей для оценки антибиотикочувстви­тельности является среда Mueller–Hinton;
  • • величина посевной дозы микроорганизма (инокулюм-эффект):
  • длительность лаг-фазы непосредственным образом свя­зана с величиной посевной дозы микроорганизмов. При очень высокой концентрации инокулята длительность лаг-фазы может сокращаться до 10–20 мин;
  • выраженный инокулюм-эффект характерен для штам­мов, продуцирующих некоторые ферменты бета-лактамазы. Увеличение концентрации инокулята с 105 КОЕ/мл до 107 КОЕ/мл может привести к повышению МПК в 32 раза и более;
  • • исходное физиологическое состояние исследуемой культу­ры, длительность и температурный режим инкубации:
  • культуры микроорганизмов, длительное время хранив­шиеся на плотных или жидких питательных средах, об­ладают пониженными ростовыми свойствами. В подав­ляющем большинстве случаев для оценки чувствитель­ности необходимо использовать "свежие" культуры, инкубировавшиеся не более 16–18 ч;
  • температура инкубации может привести как к торможе­нию, так и к увеличению скорости роста;
  • при преждевременном учете результатов (особенно в ме­тодах серийных разведений в бульоне) возможна оши­бочная оценка устойчивых штаммов как чувствительных. При позднем учете результатов возможна селекция ус­тойчивых мутантов.

Основой поддержания стандартности проведения исследо­ваний является постоянный внутрилабораторный контроль ка­чества их проведения. Такой контроль предполагает периодическое (не реже 1 раза в неделю) проведение исследова­ний антибиотикочувствительности контрольных (референсных) штаммов. Контрольные штаммы характеризуются стабильнос­тью основных фенотипических признаков и прежде всего чув­ствительностью к АБП. Если результаты оценки чувствитель­ности контрольных штаммов соответствуют их паспортным характеристикам, то это свидетельствует о стандартности ис­пользованного метода и условий проведения исследований. Если же выявляется несоответствие, то необходимо искать этап, на котором произошли нарушения.