За последнее время в фармации значительно расширилась номен­клатура фитосырья и фитопрепаратов. Лекарственное растительное сы­рье (ЛРС), составляющее основу фитопрепаратов, контаминировано многочисленными видами микроорганизмов (табл. 7, 8, 9), которые являются факторами потенциального риска.

Уровень микробиологического риска, возникающего в процессе переработки лекар­ственных растений, зависит от стадии производства. Наибольшую опасность представ­ляют операции, сопровождающиеся распылением сырья. Микроорганизмы и особенно их споровые формы могут сохраняться в течение длительного времени и способны активно развиваться в лекарственных средствах при их хранении, или в орга­низме пациента, причем этот процесс может протекать как в аэробных, так и в анаэробных условиях. В числе анаэробных бактерий важным фактором риска является Clostridium perfringens – возбудитель пищевой токсикоинфекции и в ряде случаев – газовой гангрены.

Однако идентификация анаэробных микроорганизмов в ЛРС и ле­карственных сред­ствах предусмотрена только Европейской и Британ­ской фармакопеями, где представлен метод количественного определения Clostridium perfringens как одного из патогенных и наиболее распространенных анаэробов-контаминантов. В пищевой промыш­ленности уста­нов­лены нормы и обязателен контроль определенных продуктов на содержание С. perfringens. В ГФ XIII такой контроль не предусмотрен.

Для оценки потенциального риска проведено исследование 200 об­разцов лекарственного растительного сырья и лекарственных средств на его основе, 118 серий 76 наименований видов ЛРС, полученных от 18 отечественных производителей.

Известно, что некоторые факультативные анаэробные микроорга­низмы, а также микроаэрофилы проявляют рост в анаэробных условиях и не дают роста в аэробных, поэтому исследование микробиологиче­ской чистоты проб ЛРС осуществляли чашечным двухслойным агаро­вым методом, регламентированным ГФ XII изд. Путем параллельного культивирования посевов в аэробных и анаэробных условиях с исполь­зованием одной и той же регламентируемой среды № 1. По результа­там культивирования определяли численные значения ОЧБ, вырос­ших в аэробных и анаэробных условиях, а о пригодности сырья судили по большему значению ОЧБ.

Определение возможности присутствия С. perfringens в ЛРС прово­дили путем культивирования проб в анаэробных условиях с использо­ванием селективной среды для клостридий в соответствии с методом, рекомендуемым Европейской фармакопеей.

При определении общего числа бактерий обнаружено (табл. 8), что число проб, в которых общее число микроорганизмов в анаэробных условиях превышало их количество в аэробных условиях, составило 43 (28,6 % от общего количества проб).

В настоях и отварах, приготовленных по приложенной рецептуре, число проб, в кото­рых в анаэробных условиях количество микроор­ганизмов превышало их количество в аэробных, составило 10 (20 % от общего количества проб).

Рост на селективной среде С. perfringens отмечался в 68 пробах из 150 вариантов (45 % от общего количества проб) (см. табл. 9).

Количественная оценка микробиологического риска осуществлена на основании полученных данных [79].

Дозовый риск (ДР) определяется как отношение реальной погло­щенной дозы пато­генного микроорганизма к стандартной (норматив­ной) дозе. В качестве стандартных (референтных) доз используются по­глощенные дозы, не вызывающие развития инфек­ционного процесса.

При этом величины дозового риска, соответственно: ДР<1 – как показатель отсутствия риска, 1<ДР<3 – риск. Характеризующий на­пряженную ситуацию; 3<ДР<5 – критический риск; ДР>5 – кризис­ный риск [79].

Настои и отвары, приготовленные по приложенной рецептуре, отно­сятся к категории 4А и имеют пределы допустимых норм ОЧБ не более 107 в 1 г (мл) (ГФ XII изд.). Известно, что большинство ЛРС исполь­зуется после термической обработки, в результате которой микробная загрязненность отваров и настоев снижается в среднем на 2 порядка (Гунар, 2003). Тогда предел допустимой нормы для уже приготовленных настоев и отваров составляет не более 105 в 1 г (мл).

По аналогии с микробиологическими показателями качества про­дуктов питания можно принять допустимый уровень обсемененности С. perfringens 105 клеток в 1 г (мл).

По результатам исследования настоев и отваров на содержание С. perfringens, 4 пробы из 40 (10% от общего количества), приготов­ленные из сырья взятого из аптеки и отве­чающего стандартам ГФ XII, характеризуются небольшой вероятностью возникновения пищевой токсикоинфекции (табл. 10).

Исследования на выявление клостридий в настоях и отварах пока­зали, что термическая обработка, которая рекомендуется на упаковках ЛРС, не всегда позволяет исключить наличия клостридий в готовой лекарственной форме.

Таблица 8

Микробиологическая чистота лекарственных растительных препаратов с учетом дополнительного культивирования проб в анаэробных условиях

Виды ЛРС

Общее число бактерий в 1 г

Количество проб с ОЧБ на верхнем пределе

Количество проб с ОЧБ, превыша­ющее допустимый предел

Аэробное культиви­рование

Анаэроб­ное куль­тивиро­вание

Аэробное культиви­рование

Анаэроб­ное куль-тивиро-вание

Аэробное культиви­рование

Анаэроб­ное куль­тивиро­вание

Травы
(18 наименова­ний) 40 проб

103–более 108

103–более 108

Нет

7 (17,5 %)

Нет

3 (7,5%)

Цветки
(6 наименова­ний) 18 проб

103–106

103–108

Нет

4 (22 %)

1 (2,5 %)

2 (11 %)

Листья
(10 наименова­ний) 22 пробы

103–106

102–107

Нет

1 (4,5 %)

Нет

Нет

Плоды и семе­на (16 наиме­нований)
28 проб

103–107

102–108

1 (3,6 %)

1 (3,6 %)

Нет

1 (3,6 %)

Корни и кор­невища (14 наименова­ний) 19 проб

103–108

102–108

Нет

Нет

1 (5,2 %)

1 (5,2 %)

Коры (2 наи­менования)
11 проб

103–105

102–105

Нет

Нет

Нет

Нет

Побеги, поч­ки, слоевища
(7 наименова­ний) 12 проб

103–105

102–105

Нет

Нет

Нет

Нет

Таблица 9

Количество С. perfringens в 1 г (мл) лекарственных растительных средств

Виды лекарственных растительных средств

Количество

С. perfringens
в 1 г (мл) ЛРС

Количество проб, содержащих С. perfringens

Лекарственное растительное сырье (40 проб)

   

Травы (18 наименований) 40 проб

102–105

25 (62,5 %)

Цветки (6 наименований) 18 проб

102–106

17 (94 %)

Листья (10 наименований) 22 пробы

102–107

13 (59 %)

Плоды и семена (16 наименований) 28 проб

102–104

7 (25 %)

Корни и корневища (14 наименований) 19 проб

102–106

4 (21 %)

Коры (2 наименования) 11 проб

-

Нет

Продолжение таблицы 9

Виды лекарственных растительных средств

Количество

С. perfringens
в 1 г (мл) ЛРС

Количество проб, содержащих С. perfringens

Настои и отвары, приготовленные из ЛРС
(40 проб)

102–106

6 (15 %)

Лекарственные растительные средства промышленного производства

-

Нет

Таблица 10

Величины лозового риска при приеме лекарственного растительного препарата

Лекарственный растительный препарат, количество на 1 прием (мл)

Количество посту­пивших в организм

КОЕ/мл

Пределы допусти­мых норм, КОЕ/мл
не более

Величина дозового риска

ОЧБ

С. per­fringens

ОЧБ

С. per­fringens

С учетом ОЧБ

С учетом С. per­fringens

Настой травы череды, 70

3,3·108

1,9·106

105

105

3

1

Отвар листьев сены, 100

2·108

1·106

105

105

3

1

Настой семени льна, 50

2,5·108

Отсут­ствие

105

105

3

Настой листьев

подорожника,

100

1·109

6·106

105

105

4

1

Настой рылец со столбиками кукурузы, 100

1·106

2·106

105

105

1

1

Настой цветков ромашки, 200

6·105

6·105

105

105

<1

<1

Отвар травы полыни горь­кой, 50

7·107

Отсут­ствие

105

105

2