Объединенную пробу объемом 500 см³ составляют из точечных проб, отобранных из каждой фляги или цистерны после органолептической оценки молока и рассортировки его по кислотности предельным ме­тодом по ГОСТ 3624. Для проведения редуктазной пробы и пробы на наличие ингибирующих веществ из объединенной пробы молока вы­деляют пробу объемом 50–60 см³.

Пробу, отправляемую в лабораторию вне данного предприятия, пломбируют или опечатывают и снабжают этикеткой, на которой ука­зывают.

• номер пробы;
• наименование предприятия-поставщика;
• наименование и сорт продукта (молока);
• дату и час отбора проб;
• должность и подпись лица, отобравшего пробу;
• объем необходимых анализов.

Пробы должны храниться и транспортироваться до начала иссле­дований в условиях, обеспечивающих температуру продуктов не выше 6 °С, не допуская подмораживания.

Аппаратура, материалы и реактивы:

• весы лабораторные 2-го класса точности, поверочная цена деле­ния не более 0,001 г для взвешивания реактивов, по ГОСТ 24104;
• весы лабораторные 4-го класса точности, поверочная цена деле­ния не более 0,05 г для приготовления навесок исследуемых об­разцов, по ГОСТ 24104;
• термометры стеклянные жидкостные (не ртутные), диапазон из­мерения 0–100 °С, цена деления шкалы 1 °С, по ГОСТ 28498;
• термостат, позволяющий поддерживать температуру 15–55 °С с отклонением от заданной температуры ± 1 °С;
• стерилизатор паровой медицинский по ГОСТ 19569 или автоклав горизонтальный;
• шкаф сушильный, позволяющий поддерживать температуру (160 ±5) °С;
• анализатор потенциометрический для контроля рН, диапазон измерения рН 3–8, погрешность измерения рН ± 0,05, по ГОСТ 19881;
• редуктазник, позволяющий поддерживать температуру 25–55 °С;
• баня водяная;
• пробор для счета колоний бактерий;
• микроскоп световой биологический по нормативному документу или других аналогичных марок;
• плитка электрическая по ГОСТ 14919;
• спиртовка по ГОСТ 23932;
• петля бактериологическая;
• лупа складная карманная по ГОСТ 25706;
• пробки резиновые конусные по нормативному документу;
• бумага фильтровальная по ГОСТ 12026;
• пергамент по ГОСТ 1341;
• вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556;
• кастрюли разные по ГОСТ 17151;
• пробойник;
• чашки Петри по ГОСТ 25336;
• стекла предметные для микропрепаратов по ГОСТ 9284;
• бюретки исполнения 1, 2, 3-го класса точности, вместимостью 5, 10, 50 см³, цена деления 0,1 см³;
• пипетки исполнения 1, 4, 5, 6, 7 1 и 2-го классов точности, вме­стимостью 1, 2, 5 и 10 см³;
• стаканчики для взвешивания (бюксы) типов СВ и СН по ГОСТ 25336;
• колбы исполнения 2, вместимостью 50, 100, 200, 500, 1000 см³ 2-го класса точности по ГОСТ 1770;
• цилиндры исполнения 1 и 2, вместимостью 50, 100 см³ по ГОСТ 1770;
• поплавки стеклянные;
• пробирки типов П1, П2, диаметром 16 мм, высотой 150 мм и диа­метром 21 мм, высотой 200 мм по ГОСТ 25336;
• ступки лабораторные фарфоровые по ГОСТ 9147;
• ланцет;
• натрий лимоннокислый 5,5-водный по ГОСТ 22280;
• натрий хлористый по ГОСТ 4233;
• натрия гидроокись по ГОСТ 4328;
• калия гидроокись по ГОСТ 24363, раствор с массовой концентра­цией 10 г/дм³;
• натрий двууглекислый по ГОСТ 2156, раствор с массовой кон­центрацией 100 г/дм³;
• спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962 (на территории РФ действует ГОСТ Р 51652) и спирт этиловый ректификован­ный технический по ГОСТ 18300, 96%-ный раствор;
• масло иммерсионное для микроскопии по ГОСТ 13739;
• калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198;
• кислота соляная по ГОСТ 3118;
• магний сернокислый по ГОСТ 4523;
• кристаллический фиолетовый по нормативному документу, рас­твор с массовой концентрацией 10 г/дм³;
• метиленовый голубой, индикатор по нормативному документу или аналогичный производства Индии;
• резазурино-натриевая соль по нормативному документу или резазурин в таблетках;
• вода дистиллированная по ГОСТ 6709;
• вода питьевая по ГОСТ 2874 (на территории РФ действует ГОСТ Р 512321);
• агар микробиологический по ГОСТ 17206;
• пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805;
• желчь бычья и других сельскохозяйственных животных (нативная) по нормативному документу;
• среда сухая Кесслер по нормативному документу;
• среда агаровая модифицированная для определения общего ко­личества бактерий в молоке и молочных продуктах по норматив­ному документу;
• лактоза по нормативному документу;
• порошок сычужный по нормативному документу;
• бумажки индикаторные по нормативному документу или зару­бежного производства;
• индикатор универсальный.

Подготовка к анализу. Подготовка посуды и материалов. Всю новую посуду, предназначенную для бактериологических работ, кипятят в под­кисленной воде (раствор соляной кислоты с объемной долей 1–2 %) в течение 15 мин и затем ополаскивают дистиллированной водой.

Вымытую посуду стерилизуют в сушильном шкафу при (160 ± 5) °С в течение 2 ч или в автоклаве при (121 ± 2) °С в течение (30 ± 1) мин с последующим подсушиванием.

Чашки Петри, пипетки стерилизуют завернутыми в бумагу или в металлических пеналах. В конец пипетки предварительно вклады­вают кусочек ваты. Резиновые пробки стерилизуют в автоклаве, завер­нутыми в бумагу. При отсутствии аппаратуры для стерилизации (для определения редуктазы, бродильной и сычужно-бродильной проб) посуду, пипетки и пробы непосредственно перед испытанием кипя­тят в дистиллированной воде или конденсате не менее 30 мин. Сте­рильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах или ящиках с крышками.

Приготовление питательных сред и реактивов. Приготовление рас­твора хлористого натрия. Состав: хлористый натрий – 8,5 г; питьевая вода – 1000 см³.

В 1000 см³ питьевой воды растворяют 8,5 г хлористого натрия, раз­ливают раствор в чистые пробирки диаметром 21 мм по 10 см³, а в кол­бы – по 93 см³ и стерилизуют при (121 ± 2) °С в течение (20 ± 1) мин. После стерилизации в пробирках должно остаться 9 см³ раствора хло­ристого натрия, а в колбах – 90 см³ (количество, которое необходимо для приготовления разведений из посевного материала).

Приготовление среды Кесслер (модифицированной). Состав: пептон – 10 г; стерильная желчь – 50 см³; лактоза – 2,5 г; раствор кристалличе­ского фиолетового с массовой концентрацией 10 г/дм³ – 2 см³; дис­тиллированная вода – до 1000 см³.

16 г сухой среды Кесслер помещают в колбу и доливают питьевой водой до 1000 см³. Смесь размешивают и кипятят при помешивании (25 ± 5) мин. Объем доводят питьевой водой до 1000 см³ и фильтруют через вату. Разливают в пробирки с поплавками по 5 см³ или колбочки с поплавками по 40–50 см³ и стерилизуют при (121 ± 2) °С в течение (10 ± 1) мин.

Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет.

Допускается приготовление среды Кесслер из отдельных ингреди­ентов.

Для этого к 1000 см³ питьевой воды прибавляют 10 г пептона и 50 см³ стерильной желчи (желчь бычья или других сельскохозяйственных жи­вотных), кипятят смесь при помешивании (25 ± 5) мин и фильтруют ее через вату. В полученном фильтрате растворяют 2,5 г лактозы и дово­дят объем питьевой водой до 1000 см³, устанавливают реакцию среды (рН 7,4–7,6), после чего добавляют 2 см³ раствора кристаллического фиолетового с массовой концентрацией 10 г/дм³, разливают в пробир­ки с поплавками по 5 см³ или колбочки с поплавками по 40–50 см³ и стерилизуют при (121 ± 2) °С в течение (10 ± 1) мин. Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет.

Приготовление спиртового раствора метиленового голубого для окра­ски препаратов. 10 г метиленового голубого смешивают со 100 см³ 96%-ного раствора этилового спирта. Раствор ставят в термостат при температуре (37 ± 1) °С на 24 ч, а затем фильтруют в термостате при той же температуре.

Срок хранения раствора метиленового голубого в термостате при температуре (37 ± 1) °С не более 3 мес.

Приготовление краски для препаратов. К 30 см³ спиртового раство­ра метиленового голубого прибавляют 100 см³ дистиллированной воды и 1 см³ раствора гидроокиси калия с массовой концентрацией 10 г/дм³.

Для проведения редуктазной пробы с метиленовым голубым гото­вят водный раствор с массовой концентрацией метиленового голубого 0,005 г/см³. Для этого 0,5 г метиленового голубого переносят в мер­ную колбу вместимостью 100 см³ и доводят до метки прокипяченной и охлажденной до (25 ± 2) °С дистиллированной водой. Смесь тщатель­но перемешивают до полного растворения. Срок хранения приготов­ленного раствора не более 12 мес. в банках, защищенных от света.

Для приготовления раствора метиленового голубого с массовой концентрацией метиленового голубого 0,00015 г/см³ берут 6 см³ рас­твора с массовой концентрацией 0,005 г/см³ и смешивают со 194 см³ дистиллированной воды. Срок хранения приготовленного раствора не более 30 сут в холодильнике.

Приготовление раствора резазурина. Основной раствор резазурина-натриевой соли для редуктазной пробы готовят следующим образом: 100 мг резазурина-натриевой соли переносят в мерную колбу вмести­мостью 200 см³ и доводят до метки прокипяченной и охлажденной до (25 ± 2) °С дистиллированной водой. Смесь тщательно перемешивают.

Срок хранения основного раствора резазурин-натриевой соли не более 30 сут при температуре 8–10 °С.

Рабочий раствор резазурин-натриевой соли готовят разбавлени­ем основного раствора прокипяченной и охлажденной до (25 ± 2) °С дистиллированной водой в соотношении 1 : 2,5 (например, к 10 см³ основного раствора прибавляют 25 см³ воды). Массовая доля резазу­рина в рабочем растворе 0,014%.

При использовании резазурина в таблетках для приготовления рабо­чего раствора 1 таблетку растворяют в 50 см³ прокипяченной и охлаж­денной до (25 ± 2) °С дистиллированной воды. Массовая доля резазу­рина в этом растворе 0,01 %.

Срок хранения рабочего раствора резазурина не более 3 сут при тем­пературе 0–5 °С.

Основной и рабочий раствор хранят в банках, защищенных от света.