Комплекс мероприятий, направленных на уничтожение патогенных, условно-патогенных микроорганизмов, грибов и вирусов в объектах внешней среды, объединяются в понятие дезинфекции.
Основной задачей дезинфекции в сочетании с противоэпидемическими мероприятиями, регламентированными приказами и положениями Министерства здравоохранения и Государственным санитарным эпидемиологическим надзором Российской Федерации, является прерывание механизма передачи Возбудителя на его пути от источника или резервуара инфекции к здоровому организму.
В клинико-микробиологических лабораториях, в которых врачам и микробиологам приходится постоянно контактировать с инфицированным и потенциально инфицированным патологическим материалом, выделять из него чистые культуры возбудителей различных инфекционных болезней и выполнять ряд микробиологических и серологических диагностических исследований для определения видовой принадлежности выделенного микроорганизма, дезинфекция приобретает особенно большое значение с точки зрения профилактики заражения, возникновения случаев внутрибольничных инфекций и выноса возбудителя за пределы лабораторий.
Методы дезинфекции подразделяют на физические (термические, действие УФ-лучей) и химические. Выбор того или иного способа дезинфекции определяется конкретными условиями выполняемой работы, биологическими свойствами микроба-возбудителя, конструктивными особенностями обеззараживаемого изделия и физико-химической спецификой материала, на поверхности или внутри которого содержится возбудитель.
В медицинских микробиологических лабораториях наиболее широкое применение в целях дезинфекции находят термические и химические методы обеззараживания.
Химические средства действуют на обеззараживаемые объекты более поверхностно, чем высокая температура, тем не менее на практике они значительно удобнее и доступнее, чем применение высокой температуры.
Кроме того, многие изделия, портящиеся под воздействием кипячения или сухого жара, переносят без ущерба действие химических дезинфектантов.
В качестве средств дезинфекции и предстерилизационной очистки используют только разрешенные в установленном порядке в Российской Федерации химические средства.
За последние 1,5–2 десятилетия арсенал химических средств дезинфекции увеличился в несколько десятков раз. Если ранее в распоряжении микробиологов в основном была хлорная известь и ее производные: осветленные растворы хлорной извести, хлорамин, лизол и раствор фенола (карболовая кислота), то в настоящее время имеется несколько химических групп соединений, каждая из которых включает по нескольку дезинфицирующих средств, обладающих различными свойствами.
Однако каждый из применяемых дезинфицирующих препаратов должен иметь разрешение к применению, зарегистрированное в установленном порядке Министерством здравоохранения Российской Федерации и Департаментом Госсанэпиднадзора Российской Федерации.
Наибольшее применение в микробиологической практике получили дезинфектанты отечественного и зарубежного производства, относящиеся к следующим группам химических соединений.
- Дезинфицирующие средства на основе четвертичных аммониевых соединений. По своему физико-химическому составу и строению препараты этой группы очень удачно сочетают в себе дезинфицирующие и моющие свойства. Они не имеют резкого запаха, не обладают аллергенным действием, не вызывают раздражения глаз и слизистых оболочек верхних дыхательных путей. Основным действующим веществом этих средств является дидецилдиметиламмоний бромид (ДДАБ), который не содержит в своем составе фенольной группы, что резко снижает его токсичность. Четвертично-аммониевые соединения используются одновременно как моющие, дезодорирующие препараты, а также как средства предстерилизационной очистки медицинского инструментария.
- Альдегидсодержащая группа препаратов, действующим началом которой служат глутаровый или янтарный альдегид, с дополнением или без дополнения активно действующих веществ, таких как четвертично-аммонийные соли или поверхностно-активные вещества (ПАВ), обладающие способностью моющего, дезодорирующего и частично растворяющего действия. Дезинфектанты этой группы обладают широким спектром активности: бактерицидным, туберкулоцидным, вирулоцидным (ВИЧ, гепатит) и фунгицидным. Препараты этой группы используются, как правило, для дезинфекции, совмещенной с предстерилизационной очисткой. Однако их недостатком является то, что они фиксируют на обрабатываемых объектах органические загрязнения и обладают сенсибилизирующим эффектом.
- Дезинфицирующие средства на базе полигуанидина, сложного органического вещества, большей частью в комплексе с другими дезинфицирующими средствами, обладают пролонгированным действием, невысокой токсичностью и не вызывают коррозии металлов. Препараты этой группы обладают широким диапазоном бактерицидного действия, однако для его проявления в отношении ряда бактерий, в частности микобактерий туберкулеза и вирусов, эти средства должны использоваться в высоких концентрациях (1–2 %) действующего вещества; на спороносную микрофлору даже в высоких концентрациях препараты полигуанидина влияния не оказывают.
- Кислородсодержащие вещества с пергидролем (Н2О2) используют большей частью с добавлением 0,5 % раствора моющего средства типа "Прогресс", "Астра" в целях дезинфекции и предстерилизационной очистки инструментов. Для снижения коррозийного действия к смеси растворов перекиси водорода и моющего средства добавляют 1,4 % ингибитора коррозии олеата натрия (малотоксичное соединение, относящееся к мылам). Рабочие растворы пергидроля используются иногда для влажной уборки помещения лаборатории.
- Группа спиртов – этанола, пропанола, изопропанола – находит применение в дезинфекции в виде отдельных препаратов или в сочетании с другими дезинфицирующими средствами. Этиловый ректификованный спирт рекомендуется только для дезинфекции изделий из металла. Для изделий из прочих материалов разрешены к применению дезинфектанты на основе других спиртов с добавлением поверхностно-активных веществ, обладающих детергентным свойством. Дезинфицирующие средства, содержащие спирты, фиксируют на обрабатываемых поверхностях загрязнения органического происхождения, которые приходится отмывать проточной водой с применением ершей, щеток, марлевых или бязевых салфеток.
- До настоящего времени широкое применение находят хлорсодержащие препараты, в частности хлорамин Б, хлоргексидин, биглюконат, хлорина, хлорэффект, хлоросепт Б.
Несмотря на стойкий и резкий запах хлорсодержащих препаратов, раздражающее действие на слизистые оболочки верхних дыхательных путей, они находят широкое применение в клинико-микробиологических лабораториях благодаря высокой бактерицидной активности для предварительной дезинфекции патологического материала и использованных в работе культур микробов.
▲ Фенолсодержащие вещества в настоящее время в бактериологической практике применяются очень ограниченно. Фенол как дезинфектант запрещен для применения в лаборатории из-за высокой токсичности и сильного стойкого запаха.
В табл. 4.1 приведены в качестве примера несколько наиболее простых и распространенных дезинфектантов для предстерилизационной очистки изделий медицинского назначения: ножниц, скальпелей, изделий из стекла, резины и пластмасс.
Таблица 4.1. Средства предстерилизационной очистки
Средство |
Концентрация рабочего раствора, % |
Способ очистки |
Вид изделий |
Велтолен "Велт" (Россия) |
1,0; 1,5 |
Ручной |
Изделия из стекла, резин, пластмасс, металлов |
Септабик ("Абик", Израиль) |
0,15; 0,2 |
Ручной |
То же |
Септодор ("Дорвет ЛТД", Израиль) |
0,2; 0,3 |
Ручной |
» » |
Септодор-форте ("Дорвет ЛТД", Израиль) |
0,4 |
Ручной |
» » |
Раствор, содержащий перекись водорода и моющее средство ("Лотос-автомат", "Астра", "Прогресс") |
0,5 |
Механизированный струйный метод, ершевание и ручной |
Изделия из стекла, резин, пластмасс, коррозиестойких металлов |
"Астра", "Прогресс" (Россия) |
1,5 |
Ручной с применением кипячения |
Изделия из стекла, резин, пластмасс, металлов |
Примечание. Материалы из книги «Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения». М., 2000 г. Утверждены руководителем Департамента Минздрава России 30.12.1998 г. №МУ-287-113.
С начала до конца рабочего дня в бактериологической лаборатории врачи и лаборанты одновременно с повседневной работой: приемом клинического материала, первичным посевом, выделением чистых культур микроба – возбудителя и его идентификацией – ведут непрерывную, плановую работу по текущей дезинфекции, предусматривающую обеззараживание отработанного патологического материала, посуды, в которой он находился, исследованных культур микробов, пипеток, инструментов и пр.
При выборе дезинфектанта руководствуются Санитарными Правилами 1.2.731–99, составленными на основе биологических свойств предположительно находящегося в материале возбудителя, возможной степени микробного обсеменения, консистенции и свойств среды, в которой потенциально находится Возбудитель (табл. 4.2).
Таблица 4.2. Обеззараживание поступивших на бактериологическое исследование выделений больных
Объект, подлежащий обеззараживанию |
Способ обеззараживания |
Обеззараживающее средство |
Время обеззараживания (мин) |
Норма расхода дезинфектанта |
I. Бактерии, не образующие спор (кроме микобактерий) |
||||
Мокрота, оформленные фекалии, смешанные с мочой или водой примерно 1:5, рвотные массы |
Засыпать и размешать |
1. Сухая хлорная известь 2. Белильная термостойкая известь 3. ДТС ГК 4. ДСГК |
60 |
200 г/л |
НГК |
120 90 |
150 г/л 20 г/л |
||
ГКТ |
120 |
200 г/л марка А 250 г/л марка Б |
||
Моча |
Залить |
2 % раствор хлорной извести или белильной термостойкой жидкости |
60 |
Соотношение 1:1 |
2 % раствор хлорамина Б или ХБ |
60 |
Соотношение 1:1 |
||
1 % раствор ДТС ГК или НГК |
60 |
Соотношение 1:1 |
||
II. Микобактерии |
||||
Мокрота |
Кипячение |
2 % раствор пищевой соды |
15 |
|
Заливание и перемешивание |
2,5 % раствор хлорамина Б или ХБ |
240 |
Мокрота 1 ч Дезраствор 2 ч |
|
Засыпание и перемешивание |
Хлорная известь или – термостойкая белильная известь |
60 |
200 г/л |
|
Хлорамин Б или ХБ с активатором (1:1) |
60 |
50 г/л |
||
ДТС ГК |
60 |
100 г/л |
||
ДСГК или ГКТ |
180 |
200 г/л |
||
НГК |
120 |
100 г/л |
||
ДП-2 |
240 |
150 г/л |
||
Оформленные фекалии, смешанные с мочой или водой, примерно 1:5, жидкие фекалии, рвотные массы |
Дезинфицирующие средства и режимы обеззараживания такие же, как и мокроты (кроме кипячения) |
|||
III. Бактерии, образующие споры |
||||
Испражнения больного |
Засыпать и размешать |
Сухая хлорная известь Белильная термостойкая известь |
120 |
500 г/кг |
ДТС ГК, ДСГК или НГК (сухие) |
120 |
400 г/кг |
||
Моча |
Засыпать и размешать |
Сухая хлорная известь Белильная термостойкая известь |
120 |
200 г/л |
ДТС ГК, ДСГК или НГК (сухие) |
120 |
100 г/л |
||
IV. Вирусы и хламидии |
||||
Мокрота, фекалии, рвотные массы |
Засыпать и размешать |
Хлорная известь Белильная термостойкая известь |
90 |
200 г/кг |
ГКТ, ДСГК |
120 |
200 г/кг |
||
ДТС ГК, ГКТ, НГК, ДСГК |
60 |
35 г/л |
||
V. Риккетсии |
||||
Мокрота, испражнения |
Засыпать и размешать |
Сухая хлорная известь Белильная термостойкая известь |
120 |
400 г/кг |
ДТС ГК, НГК, ГКТ (в сухом виде) |
120 |
500 г/кг |
||
Моча, жидкость после ополаскивания зева |
Засыпать и размешать |
Сухая хлорная известь, белильная термостойкая известь |
60 |
70 г/л |
ДТС ГК, НГК или ГКТ |
60 |
100 г/л |
||
ГКТ |
90 |
100 г/л |
Для обеззараживания крови и ее сгустков используют 5 % раствор хлорамина Б или ХБ аналиты, получаемые электрохимическим методом на установках, разрешенных к производственному применению в установленном порядке. Дезинфицирующие средства используют в соответствии с режимами, указанными в Методических указаниях, утвержденных Госсанэпиднадзором России (1.01.97 г.) и Министерством здравоохранения Российской Федерации (1.01.97 г.). Вместо указанных дезинфектантов можно использовать 3 % осветленный раствор хлорной извести; 0,6 % осветленный раствор нейтрального гипохлорита кальция; 0,5 % раствор ДП-2.
При использовании дезинфицирующих и стерилизующих средств необходим систематический контроль стабильности концентраций их рабочих растворов.
В последние годы НПФ "ВИНАР" (Россия) разработаны новые виды изделий – индикаторные одноразовые полоски экспресс-контроля концентрации рабочих растворов дезинфицирующих и стерилизующих средств "Дезиконт", предназначенные для экспресс-контроля соблюдения концентраций рабочих растворов хлорамина, хлорной извести, гипохлорита натрия, нейтрального анолита, перекиси водорода в лечебно-профилактических учреждениях и дезстанциях.
Однако нельзя исключить возможности того, что среди остатков использованного материала находится кровь или ее сгустки, содержащие вирус иммунодефицита человека или гепатита В и С.
В связи с этим наиболее целесообразно оставшуюся от первичных посевов кровь собрать в специальный бак, плотно закрыть его крышкой, запломбировать и сдать в стерилизацию.
Обеззараживание производят в паровом стерилизаторе (автоклаве) при температуре 132 °С, давлении 2 кгс/см2 в течение 60 мин[1].
Из числа разрешенных к применению дезинфектантов в контейнерах могут быть использованы 3 % раствор хлорамина Б или хлорамина ХБ, 0,25 % по активному хлору раствор гипохлорита натрия; аналит, 2 % раствор дексона-1 или дексона-4, 3 % раствор ПФК/1, 3 % раствор перекиси водорода с 0,5 % моющего средства, 3 % раствор пероксимеда, 10 % раствор Демоса. Использованные в работе предметные и покровные стекла подлежат обязательной дезинфекции, так как неоднократно отмечались случаи сохранения жизнеспособных микроорганизмов в фиксированных и окрашенных мазках. В целях предстерилизационной обработки для стекол может быть использован тот же дезинфицирующий раствор, который применяется для дезинфекции остальных предметов. Однако приоритетное значение имеет 96 % этиловый спирт с 3 % перекисью водорода.
Через 1–2 дня после накопления достаточного количества стекол в банке их с целью обезжиривания обрабатывают хромовой смесью; последняя, являясь сильным окислителем, разрушает органические вещества с образованием растворимых газообразных продуктов. Перед употреблением хромовую смесь подогревают до 45–50°С и заливают ею грязные стекла.
Приготовление хромовой смеси
Пропись первая. В колбу емкостью 200 мл наливают 150 мл концентрированной серной кислоты, туда же всыпают 25 г измельченного бихромата калия. Полученную смесь взбалтывают и оставляют стоять до растворения. Через сутки раствор темно-оранжевого цвета может быть применен для мытья посуды. Перед употреблением смесь следует подогреть до температуры 45–50 °С. Изменение темно-оранжевого цвета хромовой смеси на темно-зеленый свидетельствует об ее непригодности.
Пропись вторая. В 500 мл дистиллированной воды растворяют 5 г неочищенного измельченного бихромата калия и затем, перемешивая жидкость, тонкой струей вливают ее в 500 мл концентрированной серной кислоты.
При приготовлении хромовой смеси и мытье ею посуды нужно надевать резиновые перчатки, так как попадание на кожу хромовой смеси вызывает болезненные ожоги; нельзя насасывать хромовую смесь в пипетки ртом; в хромовую смесь, содержащую кислоту, нельзя вливать воду.
Пробирки, чашки Петри с отработанным материалом сдают в стерилизационную для обеззараживания насыщенным паром при 126 °С под давлением 1,5 кгс/см2 в течение 60 мин для неспорообразующих форм микроорганизмов и при 132 °С, давлении 2 кгс/см2 в течение 90 мин для уничтожения споровых культур (СП 1.2.731-99).
Для предупреждения инфицирования окружающей среды перенос инфицированного материала (посуды и культур) для обеззараживания осуществляется в закрывающихся емкостях.
Все перечисленные мероприятия, не относящиеся непосредственно к основным микробиологическим операциям, но постоянно сопутствующие им и определяющие чистоту микробиологического исследования, а, следовательно, и его достоверность, составляют комплекс мероприятий текущей дезинфекции, необходимый для микробиологических лабораторий.
Все работы с экспериментальными животными ведутся в боксах, оснащенных бактерицидными лампами, с участием двух сотрудников.
Перед входом в боксированное помещение сотрудники переодеваются: надевают шапочку или косынку, заменяют медицинский халат на хирургический, доходящий до нижней трети голени, надевают резиновые перчатки, тапочки, а при необходимости – маски или респираторы. Инструментарий, примененный в работе с лабораторными животными (шприцы многоразового пользования после вакцинации или заражения животных, взятия крови, инструменты для вскрытия), сдают в стерилизационную для обработки (кипячения, автоклавирования) или обрабатывают в боксе дезинфицирующими средствами. Режим дезинфекции определяется биологией возбудителя, который использовался в работе с экспериментальными животными (табл. 4.3).
Таблица 4.3. Обеззараживание инфицированных инструментов, использованных в работе с экспериментальными животными
Объект, подлежащий обеззараживанию |
Способ обеззараживания |
Обеззараживающее средство |
Время обеззараживания, мин |
I. Бактерии, не образующие спор (кроме микобактерий) |
|||
Инструменты после заражения и вскрытия лабораторных животных |
Паровой стерилизатор (автоклав) |
Водяной насыщенный пар под давлением 1,5 кгс/см2, 126 °С |
30 |
Кипячение |
2% раствор пищевой соды |
15 |
|
Погружение |
Вода |
30 |
|
1% раствор хлорамина |
30 |
||
3% раствор формалина (по формальдегиду) |
30 |
||
3 % раствор перекиси водорода |
80 |
||
3 % раствор перекиси водорода с 0,5 % моющего средства |
80 |
||
0,1 % раствор дезоксона-1 или дезоксона-4 |
15 |
||
3 % раствор пероксимеда |
30 |
||
Инструменты после заражения и вскрытия лабораторных животных |
Погружение |
0,5 % раствор ПВК |
30 |
5 % раствор спорокса |
30 |
||
1 % раствор велтолена |
60 |
||
1,5 % раствор бианола |
30 |
||
Глутарал или глутарал Н (без разведения) |
15 |
||
П. Микобактерии |
|||
Инструменты после заражения и вскрытия лабораторных животных |
Паровой стерилизатор (автоклав) |
Водяной насыщенный пар под давлением 1,5 кгс/см2, 126±2 °С |
30 |
Кипячение |
2 % раствор пищевой соды |
15 |
|
5 % раствор хлорамина Б или ХБ |
240 |
||
0,5 % раствор ДП-2 |
60 |
||
3 % раствор перекиси водорода |
180 |
||
Погружение в растворы |
2,5 % раствор ПВК |
60 |
|
3 % раствор пероксимеда |
120 |
||
3 % раствор аламинола |
60 |
||
1,5 % раствор бианола |
30 |
||
Глутар или глутар Н (без разведения) |
90 |
||
III. Бактерии, образующие споры |
|||
Инструменты после заражения и вскрытия лабораторных животных |
Паровой стерилизатор (автоклав) |
Водяной насыщенный пар под давлением 2 кгс/см2, 132±2 °С |
90 |
Кипячение |
2 % раствор пищевой соды |
60 |
|
IV. Вирусы и хламидии |
|||
Инструменты после заражения и вскрытия лабораторных животных |
Паровой стерилизатор (автоклав) |
Водяной насыщенный пар под давлением 2 кгс/см2, 132±2 °С |
20 |
Кипячение |
2 % раствор пищевой соды |
15 |
|
Вода |
30 |
||
I. Риккетсии |
|||
Инструменты после заражения и вскрытия лабораторных животных |
Паровой стерилизатор (автоклав) |
Водяной насыщенный пар под давлением 1,5 кгс/см2, 126 °С |
60 |
Кипячение |
2 % раствор пищевой соды |
60 |
Примечание. Приведенные материалы взяты из СП 1.2.731–99.
Трупы животных сжигают или автоклавируют в том же режиме, который использовали при обработке инструментов для их вскрытия.
[1] Цит. по: Медицинские лабораторные технологии: Справочник/Под ред. А.И.Карпищенко. – 2-е изд. – СПб.: Интермедика, 2002.–Т. 1. – С. 100.