Бактерии рода Salmonella определяют при превышении нормативов по ОКБ и ТКБ в повторно отобранных пробах; при ухудшении санитарно-гигиенической обстановки; при выборе новых источников водоснабжения и зон рекреации; при установлении влияния выбросов сточных вод на водоем; при неблагоприятной санитарно-гигиенической и эпидемической ситуации. Частота контроля определения в каждом конкретном случае проводится в соответствии с программой центров Госсанэпиднадзора.
Питьевую воду отбирают в количестве 1–3 дм3, воду открытых водоемов в количестве 1 дм3, сточную жидкость – 300–500 см3. Исследуемую воду засевают параллельно в две любые среды обогащения: селенитовый бульон (рецепты 103, 104), магниевую среду (рецепт 105), среду Мюллера–Кауфмана (рецепт 108) или тетратионатную среду (рецепт 107). Питьевую воду и воду открытых водоемов засевают в 2 флакона объемом по 500 см3 (или меньших объемов по 200 мл испытуемой воды) в равное количество среды обогащения удвоенной концентрации. Сточную воду в объеме 100 см3 засевают в равное количество среды обогащения удвоенной концентрации, 10 см3 – в 100 см3 среды обычной концентрации и 1 см3 сточной жидкости – в 10 см3 среды обогащения обычной концентрации.
Посев воды в магниевую среду для определения сальмонелл количественным методом. Количественное определение сальмонелл проводят путем посева в магниевую среду с титрованием в двух или трех параллельных рядах десятикратных разбавлений от 100 до 1 мл, прибавляя навески и растворы по прописи (рецепт 105). Индекс сальмонелл определяют по табл. 18.2.
Посев воды для определения сальмонелл методом мембранной фильтрации. Отбирают 2 объема по 500 мл исследуемой воды, Каждый объем профильтровывают через один или несколько мембранных фильтров. Полученные фильтры помещают в 50– 100 мл в любые две из перечисленных выше сред накопления. При фильтрации пробы большого объема на фильтр с диаметром пор 0,45 мкм накладывают фильтр с большим диаметром пор для задержания взвешенных веществ. В последующем оба фильтра помещают на питательную среду.
Среды обогащения с посевами воды инкубируют при температуре 37 °С в течение 18–20 ч. При обнаружении роста (помутнения) производят высев бактериологической петлей на две чашки с дифференциально-диагностическими плотными средами: на висмут-сульфитный агар (рецепт 109) и SS-aгар (рецепт 114) или среду Плоскирева (рецепт 110), среду Эндо (рецепт 96, 97), среду Левина (рецепт 111). Чашки с посевами инкубируют при температуре 37 °С в течение 18–20 ч.
На висмут-сульфитном агаре колонии сальмонелл круглые, черные, с металлическим блеском или с сероватым металлическим ободком вокруг них, зеленые, с темным центром и без него, с потемнением среды под колонией.
На SS-aгape колонии сальмонелл тифа и паратифа вырастают бесцветными. Колонии нежные, гладкие, круглые, слегка выпуклые, с ровными краями, блестящие, полупрозрачные, диаметром 1,0–2,0 мм. На среде Эндо колонии круглые, бесцветные или слегка розоватые, прозрачные. На среде Левина – прозрачные, слабо-розовые или розовато-фиолетовые.
При обнаружении колоний, подозрительных на сальмонеллы, по 4–5 изолированных колоний с каждой чашки снимаю! для посева в пробирки с комбинированными средами [типа Кл игл ера (рецепт 115), Олькеницкого (рецепт 116), среды ДУКС (рецепт 118), тест-систем (OPI 20 Е) и др.] для определения биохимических свойств, подтверждающих принадлежность к роду Salmonella. К роду Salmonella относят грамотрицательные подвижные палочки с закругленными концами, оксидазоотрицательные, сбраживающие глюкозу и маннит с образованием газа или без него, не ферментирующие лактозу, сахарозу, образующие сероводород, не расщепляющие мочевину, не образующие индол, ацетоин.
Для определения серологических свойств ставят реакции агглютинации с агглютинирующими адсорбированными поливалентными сальмонеллезными сыворотками основных групп ABCDE и сыворотками редких групп. При положительной агглютинации с целью выявления видовой принадлежности проводят дальнейшие исследования с использованием адсорбированных монорецепторных О- и Н- сальмонеллезных сывороток по действующим инструкциям.