При некоторых микробиологических исследованиях возникает необходимость посева определенного количества микробных тел в жидкую или плотную питательную среду. В таких случаях из микробной культуры, предназначенной для посева, пользуясь бактериальным стандартом мутности, готовят взвесь, содержащую в единице объема (1 мл) заданное количество микробных тел.
Государственным научно-исследовательским институтом стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича изготовлен отраслевой стандартный образец мутности ОСО 42-28–85–02П[1] для визуального определения концентрации микробной взвеси.
Комплект ОСО 42-28-85–02 состоит из двух пробирок-эталонов, соответствующих 10 и 5 единицам мутности.
Эталон ОСО на 10 единиц мутности ориентировочно соответствует следующим концентрациям клеток в 1 мл:
0,93х109 клеток/мл для микробов кишечной группы;
11х109 клеток/мл для микробов коклюшной группы;
1,7х109 клеток/мл для бруцеллезных микробов;
2,2х109 клеток/мл для холерного вибриона;
5х109 клеток/мл для туляремийных микробов.
Перед началом каждого измерения пробирку эталона ОСО, держа в руке в горизонтальной плоскости, нерезко встряхивают в течение 10–15 с с амплитудой 50–100 мм и частотой встряхивания 1–2 раза в секунду. Затем исследуемую бактериальную взвесь наливают в объеме 6–7 мл в пробирку, входящую в комплект ОСО, что соответствует объему наполнения жидкостью ОСО.
Исследуемая бактериальная взвесь должна быть гомогенной с равномерным распределением частиц взвеси в пробирке. Пробирку ОСО совмещают с исследуемой бактериальной взвесью в вертикальном положении на уровне глаз, приложив плотно к задней поверхности шрифтовую таблицу. Пробирки освещаются равномерно источником рассеянного света, которым могут быть люминесцентная лампа мощностью от 20 до 40 Вт, лампа накаливания матовая (с плафоном) мощностью от 40 до 60 Вт, а также рассеянный дневной свет.
В случае одинаковой четкости видимых элементов шрифтовой таблицы через ОСО и пробирку с исследуемой бактериальной взвесью мутность их считают одинаковой, равной мутности, указанной на этикетке ОСО. Если мутность исследуемой бактериальной взвеси не совпадает с пробиркой эталона ОСО, прибегают к уравниванию мутности, добавляя в зависимости от существующего различия физиологический раствор или микробную взвесь высокой концентрации[2].
8.3.1. Стандарт мутности по McFarland
Стандарт мутности по McFarland (МcF) также используется при приготовлении бактериальной суспензии определенной мутности. Методика его изготовления заключается в следующем:
- • Изготавливаются растворы: ВаСl2 – 1 %,
Н2SO4 - 1 %.
ВНИМАНИЕ! ВаСl2 – ядовитое вещество; Н2SO4 – обжигающее вещество.
- Для приготовления стандарта мутности и бактериальной взвеси, подлежащей исследованию, подбираются пробирки одного диаметра.
- В пробирки изготавливаемого стандарта разливается Н2SO4 в объеме, указанном в табл. 8.2, и к ней добавляется раствор ВаСl2 для получения общего объема 10 см3.
- Пробирки с изготовленным стандартом тщательно закрываются завинчивающимися пробками и заливаются сургучом.
При изготовлении исследуемой бактериальной суспензии необходимо проследить, чтобы жидкость в стандарте МсF и исследуемой пробирке была гомогенно мутной.
Количественная характеристика исследуемой микробной взвеси определяется сравнением с ближайшими по мутности пробирками тем же способом, как при использовании ОСО 42-28-85-02.
Таблица 8.2. Количественная оценка бактериальных взвесей по шкале МсРаНапс!
Номер по шкале МсF |
Объем, см3 |
Приблизительное количество, микроб/см3 |
Соответствующая микробная взвесь, х108/мл |
|
Н2SO4 1 % |
ВаСl2 1 % |
|||
0,5 |
9,95 |
0,05 |
1х108 |
1,5 |
1 |
9,9 |
0,1 |
3х108 |
3 |
2 |
9,8 |
0,2 |
6х108 |
6 |
3 |
9,7 |
0,3 |
9х108 |
9 |
4 |
9,6 |
0,4 |
12х108 |
12 |
5 |
9,5 |
0,5 |
15х108 |
15 |
6 |
9,4 |
0,6 |
18х108 |
18 |
7 |
9,3 |
0,7 |
21х108 |
21 |
8 |
9.2 |
0.8 |
24x108 |
24 |
9 |
9,1 |
0,9 |
27х108 |
27 |
10 |
9,0 |
1,0 |
30х108 |
30 |
[1] Последние две цифры в номере ОСО означают год его выпуска.
[2] Стандартный образец мутности ГНИИСК МБП им. ЛАТарасевича внесен в реестр отраслевых стандартных образцов медицинских иммунологических препаратов, допущенных к применению в системе Минздрава РФ и на предприятиях других ведомств, выпускающих иммунологические препараты.