Принцип приготовления насыщенных спиртовых растворов красок

В основе приготовления многих красящих растворов лежит предварительное получение насыщенных спиртовых растворов красок, способ изготовления которых в принципе одинаков для всех красителей.

Порошки красок в определенном для каждого красителя количестве (указанном ниже) высыпают во флаконы, заливают 96 % этиловым спиртом и ставят на 18–24 ч в термостат с 37 °С, периодически взбалтывая.

В течение указанного времени значительная часть краски растворяется, оставляя только на дне флакона небольшой оса­док.

Насыщенные растворы красок могут храниться долгое вре­мя во флаконах темного стекла со стеклянными притертыми крышками или резиновыми пробками.

Принцип приготовления рабочих спиртоводных растворов красок

Спиртоводные растворы красок готовят из насыщенных спир­товых растворов. Для этого в небольшое количество насыщенно­го спиртового раствора краски добавляют дистиллированную во­ду в разных соотношениях (в зависимости от красителя).

Метиленовый синий

Рецепт 7. Насыщенный спиртовой раствор метиленового синего

Метиленовый синий                                      8,0–9,0 г

Этиловый 96 % спирт                                    100 мл

Краска при периодическом помешивании должна настоять­ся при комнатной темп

Рецепт 8. Спиртоводный раствор метиленового синего

Метиленовый синий насыщенный
раствор (8–9 %)                                              1 мл

Этиловый 96 % спирт                                    10 мл

Дистиллированная вода                                 100 мл

Рецепт 9. Щелочные растворы метиленового синего Леффлера

Пропись 1

Дистиллированная вода                                 100 мл

10 % раствор гидроксида калия    2 капли

Насыщенный 7 % раствор
метиленового синего                                      30 мл

ературе или в термостате. 

Пропись 2
Метиленовый синий 3,0 г
Этиловый 96 % спирт 20 мл
1 % раствор гидроксида калия
(КОН) 1 мл

Дистиллированная вода 100 мл
Перемешать в указанном порядке перечисленные выше ингредиенты. Краска должна быть подвергнута "созреванию", которое протекает в течение нескольких месяцев. Процесс "созревания" может быть ускорен при аэрации раствора. Для этого посуду заполняют краской не более чем наполовину, вместо пробки используют рыхлый ватный тампон. Содержимое флакона должно часто перемешиваться. Во время хранения свойства краски улучшаются.
Щелочные растворы метиленового синего устойчивы и могут храниться во флаконе со стеклянной или резиновой пробкой длительное время, не изменяя своих свойств.

Рецепт 10. Синька Нейссера

Готовят отдельно два основных раствора.

Пропись 1

Раствор 1

Метиленовый синий                     0,1 г

Этиловый 96 % спирт                   2 мл

Ледяная уксусная кислота            5 мл

Дистиллированная вода              100 мл

Раствор 2

Кристаллический фиолетовый
насыщенный спиртовой раствор 1 мл

Этиловый 96 % спирт                   10 мл

Дистиллированная вода               300 мл

Для окраски зерен валютина непосредственно перед ок­раской смешивают 2 части первого раствора с 1 частью второго раствора.

Пропись 2

Раствор 1

Метиленовый синий                                    0,1 г

Этиловый 96 % спирт                                 5 мл

Ледяная уксусная кислота                          5 мл

Дистиллированная вода                              100 мл

Раствор 2

Хризойдин или везувин                                1,0 г

Дистиллированная вода                               300 мл

Краску растворяют в кипящей воде и фильтруют через бу­магу. Для приготовления рабочего раствора непосредственно перед применением смешать 2 части раствора первой краски и 1 часть раствора второй краски.

Рецепт 11. Водный раствор метиленового синего

Метиленовый синий                                     1,0 г

Дистиллированная вода                               1000 мл

Применяется для ориентировочной окраски препаратов, при окраске по Цилю–Нильсену кислотоустойчивых бактерий, дает отчетливо окрашенные клетки микроорганизмов на неж­но-голубом фоне.

Кристаллический фиолетовый

Кристаллический фиолетовый всегда может быть заменен генциановым или метиловым фиолетовым, поскольку эти кра­сители относятся к одному классу химических соединений, очень близки по структуре, составу химической формулы и имеют совершенно одинаковый эффект окраски.

Рецепт 12. Насыщенный спиртовой раствор кристаллического фиолетового
Кристаллический фиолетовый 8,0–10,0 г
Этиловый 96 % спирт 100 мл

Рецепт 13. Спиртоводный раствор кристаллического фиолетового
Насыщенный спиртовой раствор
кристаллического фиолетового 1 мл
Дистиллированная вода 10 мл
Раствор нестойкий, готовится на 1–2 дня

Рецепт 14. Карболовый раствор кристаллического фиолетового
Пропись 1
Кристаллический фиолетовый 1,0 г
Фенол кристаллический 2,0 г
Этиловый 96 % спирт 10 мл
Дистиллированная вода 100 мл
Карболовый раствор кристаллического фиолетового 1 г растирают в фарфоровой ступке с 2 г кристаллической карболовой кислоты и несколькими каплями глицерина. Во время растирания небольшими порциями приливают спирт. После того как краска хорошо разотрется, приливают при постоянном помешивании 100 мл дистиллированной воды. Раствор краски фильтруют через влажный бумажный фильтр. Краска нестойкая.
Пропись 2
Насыщенный спиртовой раствор
кристаллического фиолетового 10 мл
Фенола 2 % водный раствор 100 мл
Полученную смесь тщательно взбалтывают и фильтруют через бумажный фильтр. Раствор краски нестойкий, в прок не готовится.

Фуксин основной

Рецепт 15. Фуксина насыщенный спиртовой раствор

Основной фуксин                                         8,0–9,0 г

Спирт 96 % этиловый                                  100 мл

Рецепт 16. Фуксина спиртоводный раствор

Насыщенный спиртовой раствор
фуксина                                                         1 мл

Дистиллированная вода                              10 мл

Спиртоводный раствор фуксина нестойкий, поэтому гото­вят его ex tempore перед окраской препаратов.

Рецепт 17. Фуксин карболовый Циля

Пропись 1

Основной фуксин в порошке      1,0 г

Фенол кристаллический                              5,0 г

Глицерин                                                       0,5 мл

Этиловый 96 % спирт                                  10 мл

Дистиллированная вода                              100 мл

1 г основного кристаллического фуксина растирают в фар­форовой ступке с 5 г кристаллического фенола и несколькими каплями глицерина. Во время растирания фуксина с фенолом небольшими порциями добавляют спирт. После того как крас­ка хорошо разотрется, приливают при постоянном помешива­нии 100 мл дистиллированной воды. Раствор краски фильтруют через влажный бумажный фильтр. Фуксин Циля очень стойкий и может храниться долгое время во флаконе темного стекла с притертой пробкой.

Пропись 2

Насыщенный спиртовой раствор
основного фуксина                                       10 мл

5 % раствор карболовой
кислоты                                                         90 мл

Карболовую кислоту вливают в краску! Смесь в течение нескольких минут энергично встряхивают, фильтруют через влажный бумажный фильтр, после чего сливают во флакон темного стекла для хранения.

Рецепт 18. Фуксин Пфейффера
Карболовый фуксин Циля 1 мл
Дистиллированная вода 9 мл
Смесь в течение нескольких минут энергично встряхивают. Полученный раствор краски очень нестойкий, поэтому его готовят в небольших количествах только для работы на текущий день.

Красители и реагенты для окраски по Граму в модификации Г.П.Калины
Рецепт 19. Бриллиантового зеленого спиртовой раствор
Бриллиантовый зеленый 0,05 г
Этиловый 96 % спирт 10 мл
Краска хранится длительное время во флаконе темного стекла, в темноте, закрытая стеклянной притертой или резиновой пробкой.

Рецепт 20. Основной реактив Калины для окраски нейссерий по Граму
5 % раствор основного фуксина
Циля 2 мл
5 % раствор спиртового раствора
йода 2 мл
0,5 % спиртовой раствор
йодида калия 96 мл
0,5 % раствор йодида калия готовится при подогревании на водяной бане. После полного растворения навески йодида калия в 96 % спирте последний соединяют с растворами фуксина и йода. Полученную смесь хранят во флаконе темного стекла с притертой пробкой в холодильнике.

 

Приготовление красящих бумажек по Синеву

Для приготовления красящих бумажек пользуются стандарт­ной фильтровальной бумагой, которую предварительно испы­тывают на пригодность. Для этого отрезают полоску бумаги и погружают в спиртовой раствор красителя, затем высушивают на воздухе. Хорошая бумага окрашивается равномерно, без пятен. Затем от нее отрезают небольшой кусок и кладут на стекло с несколькими каплями воды. Пригодная для окраски бумага сразу пропитывается водой и через несколько секунд "отдает" краситель, вследствие чего вода вокруг становится интенсивно окрашенной в соответствующий цвет. Если этого не происходит, бумага для приготовления красящих бумажек непригодна.

Техника приготовления красящих бумажек. Краситель, пред­назначенный для пропитывания бумаги, наливают в лоток или глубокую тарелку. Бумагу нарезают в виде полосок шириной 2–2,5 см и длиной 30–50 см. Полоску погружают на несколько секунд в краситель так, чтобы смачивались обе ее поверхности. Окрашенные полосы вынимают пинцетом, дают красителю стечь и подвешивают на веревке для высушивания. Бумагу сушат на воздухе при комнатной температуре или в термостате при 37–50 °С. Высушенные полоски бумаги разрезают на ку­сочки размером 2x2 или 2x4,5 см.

Рецепт 26. Прописи растворов красителей для приготов­ления бумаги

1. Кристаллический генциановый или метиловый фиолетовый для окраски по Граму

Кристаллический фиолетовый    1,0 г

Этиловый 96 % спирт                                    100 мл

Глицерин                                                        5 мл

2. Фуксин (основной)

Фуксин                                                          2,0 г

Этиловый 96 % спирт                                   100 мл

Глицерин                                                       1 мл

3. Фуксин карболовый Циля

Пропись обычная: на 100 мл приготовленного красителя добавляют 1–2 мл глицерина

4. Метиленовый синий

Метиленовый синий                                     1,0 г

Этиловый 96% спирт                                    100 мл

Глицерин                                                       1 мл

5. Малахитовый зеленый

Малахитовый зеленый                                  5,0 г

Дистиллированная горячая вода                  100 мл

Глицерин                                                       5 мл

Рецепт 27. Тушь для выявления капсул по методу Бурри

Тушь черная                                                  5 мл

Дистиллированная вода                                15 мл

К одному объему туши прибавляют три объема дистилли­рованной воды. Разведенную тушь наливают в центрифужную пробирку и центрифугируют 15–20 мин при 2000–3000 об/ мин для осаждения крупных частиц туши.

После центрифугирования пробирку быстро переворачива­ют, сливая надосадочный слой туши, и стерилизуют в автокла­ве при 0,5 атм в течение 30 мин.

Рецепт 28. Краска Романовского–Гимзы (коммерческая)

Краска Романовского–Гимзы представляет собой сочетание органического красителя азура, получаемого из метиленового синего при воздействии на него щелочных растворов, в соче­тании с эозином и метиленовым синим.

Непосредственно перед употреблением краску разводят из расчета 1–3 капли на 1 мл дистиллированной воды рН 6,8–7,0. Изменение рН может привести к искажению результатов ок­раски или выпадению осадка, лишающего раствор способности окрашивать.

Для получения точных результатов лучше всего использо­вать буферные фосфатные растворы, разводя их дистиллиро­ванной водой в 10–20 раз.

При окраске методом Романовского–Гимзы хроматин мик­роорганизмов окрашивается в ярко-красный или красно-фио­летовый цвет, цитоплазма – в розовый.

Рецепт 29. Краситель Альберта для окрашивания гранул волютина

Малахитовый зеленый                                 0,2 г

Толуидиновый синий                                   0,15 г

Этиловый 96 % спирт                                  2 мл

Ледяная уксусная кислота                           1 мл

Дистиллированная вода                              100 мл

Растворить красители в этаноле. Смешать кислоту с водой и влить в раствор красителя. Оставить смесь для настаивания в течение 24 ч и затем профильтровать через бумажный фильтр.

Рецепт 30. Нитрат серебра для серебрения жгутиков по Морозову

Нитрат серебра (AgNO₃)
кристаллический                                          5,0 г

Дистиллированная вода                               100 мл

Нитрат серебра 5 г растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Из полученного объема отливают 20 мл в другой сосуд. К оставшимся 80 мл раствора нитрата серебра добавляют кап­лями 10 % раствор аммиака, пока не растворится оставшийся осадок и не останется легкая опалесценция. Если аммиака будет добавлено слишком много, то из отлитых в другой сосуд 20 мл раствора нитрата серебра добавляют в основной раствор столько, чтобы получить слабую опалесценцию.

Для окраски препарата приготовленный раствор нитрата серебра разводят дистиллированной водой 1:10.