Сульфитредуцирующие клостридий – это спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, редуцирующие сульфит натрия на железосульфитном агаре при температуре 44±1 °С в течение 16–18 ч.
Метод основан на выращивании посевов в железосульфитном агаре (рецепт 101) в условиях, приближенных к анаэробным, и подсчете числа черных колоний.
Первый день. Прогревают на водяной бане пробы воды по 20 мл в пробирках при температуре 75±5 °С в течение 15 мин для исключения вегетативных форм. При исследовании хлорированной воды прогревание проб не производят.
Из каждой пробы питьевой воды делают посев или фильтруют 20 мл. При необходимости подбирают объемы с таким расчетом, чтобы в посевах (на фильтрах) выросло не более 10–15 колоний.
Перед посевом пробирки с железосульфитным агаром расплавляют на водяной бане (не кипятить!). При посеве поддерживают среду нагретой до 70–80 °С на водяной бане.
При этом можно пользоваться следующими методическими приемами.
Метод фильтрования в пробирках. После фильтрования 20 мл воды мембранный фильтр фламбированным пинцетом берут за два противоположных края и согнутым в виде трубочки помещают в пробирку с горячим железосульфитным агаром. Сторона фильтра с осевшими бактериями обращена внутрь. При этом фильтр распрямляется и располагается по стенке пробирки.
Пробирку с железосульфитным агаром и фильтром для создания анаэробных условий быстро охлаждают, помещая в емкость с холодной водой. Культивируют посевы при 44±1 °С в течение 16–18 ч.
Метод фильтрования в чашках Петри. Чашки диаметром 55–60 мм заливают железосульфитным агаром тонким слоем. После застудневания очага фильтрации помещают фильтр поверхностью, на которой осели бактерии, на питательную среду так, чтобы под ним не было пузырьков воздуха. Затем расплавленный железосульфитный агар заливают до верхнего края чашки, чтобы крышка плотно прилегала к среде для создания анаэробных условий. Культивируют посевы при 44±1 °С в течение 16-18 ч.
Метод прямого посева. Проба воды разливается в стерильные пробирки:
- по 10 мл в 2 пробирки (объемом не менее 30 мл) или
- по 5 мл в 4 пробирки (объемом по 20 мл).
Посевы заливают горячим железосульфитным агаром по стенке пробирки, избегая образования пузырьков воздуха, в количестве, превышающем объем воды в 2 раза. После этого пробирки быстро охлаждают, помещая их в емкость с холодной водой для создания анаэробных условий. Посевы инкубируют при 44±1 °С в течение 16–18 ч.
Второй день. Проводят учет результатов анализа. Подсчитывают черные колонии, выросшие как на фильтрах, так и в толще питательной среды. Результат анализа выражают числом КОЕ спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды.