Как отмечено выше, фагу присущи выраженные паразитические свойства, обусловливающие существование и размножение только в культурах гомологичных микроорганизмов. На этом основании присутствие бактериофага можно рассматривать как косвенный показатель инфицированности исследуемого материала соответствующим микробом.
В практике микробиологии бактериофаг обнаруживают в том случае, когда выделение культуры микроба не дает положительного результата, например вследствие чрезмерно малого количества этих микробов в исследуемом материале или сильного загрязнения его посторонней микрофлорой.
В настоящее время разработаны различные методы качественного обнаружения фага в исследуемом материале (см. раздел 11.2), в основу которых положен засев исследуемого материала совместно с гомологичным искомому фагу бактериальным штаммом на плотные и жидкие питательные среды. Культуры микробов, чувствительные к бактериофагу, принято называть тест-культурами.
Прямой метод выделения бактериофага из исследуемого материала. Исследуемую жидкость фильтруют от микробов. Твердый материал (образцы почвы, пищевые продукты, испражнения) измельчают в ступке, эмульгируют, фильтруют через бумажный, затем через бактериальный фильтрьж Наличие фага в полученном фильтрате определяют на плотных или жидких питательных средах с использованием тест-культур.
Выделение бактериофага методом обогащения "без подсева". Исследуемый материал засевают в жидкую питательную среду, являющуюся оптимальной для развития микроорганизмов, против которых ищут бактериофаг. Посевы инкубируют в термостате при оптимальной температуре 18–20 ч. По истечении указанного срока посевы фильтруют через бумажный, а затем бактериальный фильтры.
Полученные фильтраты испытывают на присутствие бактериофага на плотных и жидких питательных средах.
В основу этого метода положен принцип создания наиболее благоприятных условий для размножения находящихся в исследуемом материале бактерий и соответствующего им искомого бактериофага.
Выделение бактериофага методом обогащения "с подсевом". Жидкий исследуемый материал непосредственно, а плотный после предварительного измельчения в ступке засевают в мясопептонный бульон или в другую жидкую питательную среду. Одновременно с исследуемым материалом вносят 0,5–1 мл 3–6-часовой бульонной культуры или смыва с суточной агаровой культуры бактерий, гомологичных выделяемому фагу. Для контроля культуру бактерий, применяемую для обогащения, засевают в стерильную питательную среду.
Посевы ставят в термостат при 37°С на 18–24 ч. После инкубации из опытной и контрольной пробирок берут по нескольку миллилитров жидкости и фильтруют через бактериальные фильтры. Полученные фильтраты исследуют на присутствие бактериофага, гомологичного бактериям, применяемым для обогащения.
Сущность данного метода заключается в предварительном обогащении исследуемого материала клетками того микроорганизма, к которому ищут бактериофаг. Бактерии, внесенные в исследуемый материал, размножаются и вместе с ними размножается фаг.