Контроль качества исследований антибиотикорезистентнос­ти основан на параллельной оценке клинических и контроль­ных (референсных) штаммов. Референсные штаммы характе­ризуются генетической стабильностью по основным показателям, в том числе и по уровню чувствительности к антибио­тикам. Величины МПК препаратов и диаметры зон ингибиции роста вокруг дисков с соответствующими антибиотиками для контрольных штаммов находятся в достаточно жестких преде­лах.

Если при оценке чувствительности контрольного штамма величина МПК или диаметр зоны ингибиции роста выходит за пределы значений, представленных в табл. 10.4 и 10.5, то это свидетельствует либо о наличии методических ошибок на каком-то этапе постановки исследования, либо о недостаточ­ном качестве используемых питательных сред и реактивов. Результаты исследования чувствительности клинических штам­мов в этом случае следует считать недостоверными. Необходимо тщательно проанализировать все этапы проведения исследова­ния и проверить качество питательных сред и реактивов.

Таблица 10.4. Значения величин МПК (мкг/мл) для референсных штаммов микроорганизмов с обычными питательными потребнос­тями

Примечание. Данные приведены для методов серийных микроразведе­ний в бульоне.

Таблица 10.5. Значения величин диаметров зон ингибиции роста (мм) для референсных штаммов микроорганизмов с обычными пи­тательными потребностями

Выбор референсных штаммов для проведения контрольных исследований определяется видом исследуемого микроорга­низма. При контроле качества оценки антибиотикочувстви­тельности отдельных групп микроорганизмов необходимо ис­пользовать следующие контрольные штаммы:

• Staphylococcus spp.– S.aureus АТСС 29213 – для методов се­рийных разведений и АТСС 25923 – для диско-диффузион­ного (рис. 10.5 – см. вклейку).
• Enterococcus spp. – E.faecalis АТСС 29212 – для метода се­рийных разведений и скрининга на высокий уровень резис­тентности к аминогликозидам; S.aureus АТСС 25923 – для диско-диффузионного.
• Enterobacteriaceae – E.coli АТСС 25922.
• Pseudomonas spp., Acinetobacter spp. и другие неферментирую-щие – P.aeruginosa АТСС 27853 (рис. 10.6 – см. вклейку).

Исследования по контролю качества оценки антибиотико­чувствительности рекомендуется проводить не реже 1 раза в неделю.

Методы контроля качества питательных сред. Качество пи­тательной среды является одним из критических параметров для проведения корректной оценки антибиотикорезистентности. Важнейшими показателями качества питательной среды являются концентрации двухвалентных катионов Са²⁺ и Mg²⁺, влияющих на активность аминогликозидных антибиотиков и тетрациклинов, а также тимина и тимидина, являющихся ан­тагонистами сульфаниламидных препаратов и триметоприма.

В международной практике основной средой, используемой во всех методах оценки антибиотикорезистентности, является среда Mueller–Hinton и др. (рецепты 85, 86)). Рассматриваемые в последующих разделах критерии величины МПК, позволяю­щие отнести исследуемые микроорганизмы к одной из кате­горий: "чувствительные", "устойчивые" или "промежуточ­ные", – разработаны именно для среды Mueller–Hinton.

Следует признать возможность использования для оценки антибиотикорезистентности и других сред, например АГВ, в том случае если они удовлетворяют описанным ниже требованиям.

Перед использованием в экспериментах по оценке антибио­тикорезистентности каждая новая партия среды (Mueller–Hin­ton или какой-либо другой) должна пройти контроль качества в соответствии с описанным ниже методом.

Определение pH среды проводят после автоклавирования, внесения всех необходимых добавок и охлаждения до комнат­ной температуры (25 °С); приемлемый диапазон 7,2–7,4. При величине pH среды, выходящей за указанные пределы, возмож­ны существенные изменения в величине МПК.

Контроль катионного состава. Для получения воспроизводимых результатов оценки антибиотикорезистентности питательная сре­да должна содержать Са²⁺ 20–25 мг/л и Mg²⁺ 10–12,5мг/л. Применение метода атомной абсорбционной спектрофотометрии для непосредственной оценки концентрации двух­валентных катионов в среде в повседневной практике малоре­ально.

Наиболее доступным интегральным методом оценки каче­ства сред (как жидких, так и агаризованных) является сопо­ставление экспериментально полученной величины МПК ре-ференсных штаммов микроорганизмов с этим показателем, приведенным в их паспортной характеристике.

Наиболее подходящим штаммом для оценки качества жид­ких и плотных питательных сред, предназначенных для изуче­ния антибиотикорезистентности, является штамм Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853. Среду следует считать удовлетворитель­ной по качеству, если величина МПК гентамицина находится в пределах 0,5–2,0 мкг/мл. Выбор гентамицина для контроля качества связан с тем, что аминогликозидные антибиотики наиболее чувствительны к колебаниям концентрации двухва­лентных катионов.

Для контроля на наличие антагонистов сульфаниламидных препаратов и триметоприма рекомендуется использовать штамм Enterococcus faecalis АТСС 29212. При величине МПК триметоприма/сульфаметоксазола <0,5/9,5мкг/мл среду следу­ет признать удовлетворительной по качеству.

Определение величины МПК антибиотиков (или диаметров зон ингибиции роста) в отношении референсных штаммов в целях контроля качества среды проводят в. соответствии с опи­санными выше методами.